肠毒素大肠杆菌CFA/1重组质粒的高效表达

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zbc518
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在CFA/1结构基因和调节基因分别克隆的基础上,采用限制性内切酶HindⅢ部分酶切、重新连接,筛选鉴定,得到了两种连接方向的重组子。将两种质粒分别转化至三种不同的大肠杆菌K12受体菌中测定表达产物。用ELISA测定的结果表明,在不同宿主中合成的抗原量不同。在HB101受体菌中,其CFA/1的表达水平与野生株相似;在C600和RR1中,比野生株高2~3倍。然而,在相同菌株中,连接方向不同的两种质粒表达CFA/1抗原的水平相近。重组质粒在不同的大肠杆菌受体菌中稳定性有很大差异。在不加抗生素的非选择性LB肉汤中,传代培养100代后,用抗生素平板、基因探针和ELISA等分别检测质粒的存在情况。发现在RR1中,70%的细菌细胞丢失了重组质粒,而在C600和HB101中,几乎100%的细胞含有表达CFA/1的重组质粒。重组克隆株经乳鼠试验和兔肠结扎试验证实无毒性反应。因此重组克隆株可作为预防人源ETEC腹泻的活菌苗候选株。

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