论文部分内容阅读
目的 初步探讨热休克蛋白70 (heat shock protein 70,HSP7O)抑制脓毒症血清所致心肌细胞凋亡及其机制.方法 将原代培养心肌细胞分组:正常对照组、正常大鼠血清组、脓毒症血清组、转空载体对照组和转HSP70基因组,转HSP70基因组以重组质粒pcDNA3.1-HSP70转染后36 h后验证基因和蛋白表达；各组以相应血清混合培养2h;分别行Hoechst 33258染色后计数以及DNA“梯状”条带检测心肌细胞凋亡,再应用Western-blot分析HSP70过表达对Caspase-3,8,9活化和Bid裂解的影响情况.结果 处理后12、24、36 h凋亡率,转HSP70基因组心肌细胞为(12.48±2.39)％、(23.96±3.12)％、(25.40±3.96)％,明显低于脓毒症血清组[(28.66±2.24)％、( 55.76±5.69)％、(46.89±8.74)％,t =5.851、5.932、6.027,P＜0.01],亦明显低于转空载体组[(34.25±3.42)％、(50.71±6.38)％、(47.62±5.74)％,t=5.876、5.903、6.122,P＜0.01],但明显高于正常对照组和正常血清组(3.13％ ～6.75％,t=6.324、6.578、6.137、5.987、6.032、6.871,P＜0.01)；在Caspase-3、8、9活化表达中,P11、P20和P10条带比值,转HSP70基因组分别为(12.5276±2.1247、9.3481±4.5423、16.1349±6.0641),低于脓毒症血清组(27.1324±2.1564、25.5643±4.3018、36.5647±6.7135,t=5.856、5.902、5.891,P＜0.01),低于转空载体组(28.0314±2.0367、25.6413±4.1356、34.5648±5.9473,t=3.861、3.933、4.281,P＜0.05),高于正常对照组(8.0324±1.5234、5.1246±1.3274、2.0314±0.6423,t=3.286、3.867、4.031,P＜0.05)和正常血清组(8.5649±1.2136、6.0324±1.0214、3.2146±0.1325,t=5.898、5.969、6.879,P＜0.01)；tBid条带比值,转HSP70基因组(12.0316±2.3641)低于脓毒症血清组(27.0536±5.3214,t=3.274,P＜0.05)和转空载体组(27.1034±3.6741,t=3.301,P＜0.05),但高于正常对照组(6.0347±2.1304,t=5.924,P ＜0.01)和正常血清组(7.3121±1.3021,t=5.871,P＜0.01).结论 HSP70通过干预死亡受体通路和线粒体通路而抑制脓毒症血清所致的细胞凋亡.