【摘 要】
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【目的】探讨川芎内酯对结肠癌细胞的抑制作用及其机制。【方法】（1）体外研究:选择SW620和SW480 2种结肠癌细胞株。应用不同浓度的川芎内酯处理细胞24 h后,用细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测细胞活力。选择浓度为0、25、50、100μmol/L的川芎内酯处理SW620和SW480细胞株,采用克隆形成实验检测增殖能力,采用流式细胞术检测癌细胞凋亡,采用蛋白免疫印迹（Western Blot
【基金项目】
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义乌市科学技术项目（编号：19-3-126）；
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【目的】探讨川芎内酯对结肠癌细胞的抑制作用及其机制。【方法】（1）体外研究:选择SW620和SW480 2种结肠癌细胞株。应用不同浓度的川芎内酯处理细胞24 h后,用细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测细胞活力。选择浓度为0、25、50、100μmol/L的川芎内酯处理SW620和SW480细胞株,采用克隆形成实验检测增殖能力,采用流式细胞术检测癌细胞凋亡,采用蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（p21）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 （Caspase-3）及裂解的Caspase-3（cleaved Caspase-3）的表达,采用流式细胞术检测线粒体膜电位的变化,按照试剂盒说明方法检测超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量,应用显微镜观察SW620和SW480干细胞成球情况,采用Aldefluor分析法检测乙醛脱氢酶（ALDH）活性,采用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测干细胞标记物Nanog、八聚体结合转录因子4（OCT4）和性别决定域Y蛋白2（SOX2）的表达。（2）体内研究:裸鼠皮下接种SW480细胞构建荷瘤模型,加药组给予川芎内酯5 mg/kg处理,每5 d检测瘤体积。30 d后,处死祼鼠取出肿瘤称质量,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）染色检测肿瘤组织细胞凋亡,免疫组织化学法检测肿瘤组织中p21和SOX2的表达,按照试剂盒说明方法检测肿瘤组织MDA和SOD含量。【结果】与川芎内酯0μmol/L组比较,川芎内酯50μmol/L对SW620细胞活力有明显抑制作用（P <0.05）,川芎内酯25μmol/L对SW480细胞活力有明显抑制作用（P <0.05）。川芎内酯明显降低结肠癌细胞存活率（P <0.05）,增加细胞凋亡率（P <0.05）,上调p21和cleaved Caspase-3的表达水平（P <0.05）,降低线粒体膜电位,增加SOD的含量（P <0.05）,减少MDA的含量（P <0.05）,减小结肠癌细胞成球直径的大小（P <0.05）,降低ALDH活性及Nanog、OCT4和SOX2的表达（P <0.05）。体内移植实验结果显示,川芎内酯减小肿瘤体积（P <0.05）,增加肿瘤组织中TUNEL阳性细胞数目（P <0.05）,减少p21和SOX2阳性细胞数（P <0.05）,增加SOD的含量（P <0.05）,减少MDA的含量（P <0.05）。【结论】川芎内酯在体内、体外均可抑制结肠癌细胞的生长,主要通过诱导氧化应激、破坏线粒体功能诱导细胞凋亡,抑制结肠癌干细胞特性阻止结肠癌发生转移。
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