濒危植物香果树(Emmenopterys henryi) SRAP反应体系的建立与引物筛选

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以珍稀濒危植物香果树(Emmenopterys henryi)基因组DNA为研究对象,对影响SRAP-PCR反应的因素如Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶、引物浓度4因素进行优化.确定香果树SRAP反应体系为:20 μL PCR反应体系,50 ng模板DNA,1×Buffer,2.5 mmol/L Mg2+,1UTaq聚合酶,0.3 mmol/L dNTPs,正向和反向引物各0.3 μmol/L;在香果树2份样品中进行引物初筛,利用已发表的SRAP引物,选取8条正向引物和8条反向引物,共计64对引物.从中筛选出10对重复性好,谱带清晰且稳定的引物.并将这些引物在香果树2个野生居群20份样品中进行遗传多样性分析,共得到72条扩增谱带,其中多态性谱带60条,多态性比率83.3%,平均每个引物组合产生6个多态性位点,供试材料间遗传变异相对丰富.“,”The concentration of Mg2+,template DNA,dNTPs,Taq DNA polymerase and primers which affected SRAP-PCR reaction were optimized,and selected using Emmenopterys henryi genomic DNA as the materials.The results showed that the optimum reaction system for SRAP-PCR ofE.henryi were as follows:template DNA 50 ng,1 xBuffer,Mg2+ 2.5 mmol/L,dNTPs 0.3 mmol/L,Taq DNA polymerase 1U,forward and reverse primers were all 0.3 μmol/L,and total volume of reaction system 20 μL.SRAP primer combinations which showed steadily,well-defined and scorable PCR amplification in 2 accessions (1 red bud and 1 green bud) were screened out from 64 primer combinations (8 forward primers and 8 reverse primer).10 SRAP primer combinations had produced 72 amplified loci in 20 accessions of 2 populations,among which 60 were shown polymorphism level (average of 6 bands per primer pairs),with a polymorphic ratio of 83.3%.
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