【摘 要】
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目的 为探讨抑癌基因 p16INK4A和 p15INK4B对Rb基因状态不同的人肝癌细胞系增殖和凋亡的影响.方法在分析细胞系遗传背景鉴定基础上采用脂质体将构建的pXJ-p16、pXJ-p15重组质粒转染人肝癌细胞系BEL7402(p16+/p15+ Rb+)和SMMC7721(p16+/p15+/Rb-).应用PCR、RNA斑点印迹、MTT、集落形成、流式细胞仪等技术检测外源性 p16和 p15基
【机 构】
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610041,成都,四川大学基础与法医学院生物化学与分子生物学教研室,610041,成都,四川大学基础与法医学院生物化学与分子生物学教研室,华西医院普外科,610041,成都,四川大学基础与法医学院生
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目的 为探讨抑癌基因 p16INK4A和 p15INK4B对Rb基因状态不同的人肝癌细胞系增殖和凋亡的影响.方法在分析细胞系遗传背景鉴定基础上采用脂质体将构建的pXJ-p16、pXJ-p15重组质粒转染人肝癌细胞系BEL7402(p16+/p15+ Rb+)和SMMC7721(p16+/p15+/Rb-).应用PCR、RNA斑点印迹、MTT、集落形成、流式细胞仪等技术检测外源性 p16和 p15基因、mRNA表达及其对肝癌细胞增殖、凋亡的影响.结果经转染的BEL7402-p16,BEL7402-p15细胞,分别存在外源性 p16、p15基因,在含外源基因细胞中相应的mRNA表达增强; BEL7402-p15细胞生长速度、集落形成率显著低于对照细胞BEL7402(P<0.01); 细胞周期分析观察到与亲本细胞比较,BEL7402-p15的G1期细胞由37.7%增高到43.6%,S期细胞由22%下降到13%(P<0.05),并出现 G1亚峰(凋亡峰).与此相反,BEL7402-p16细胞增殖未见抑制,细胞周期分布无明显差异,集落形成率也未见减少.此外,SMMC7721-p16细胞增殖也无抑制.结论外源性 p15INK4B具有抑制人肝癌细胞生长,诱导细胞凋亡的作用,其作用不受内源性 p15影响.而 p16INK4A对肝癌细胞生长抑制的作用可能依赖于RB途径的完整性。
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