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建立了高效液相色谱-串联质谱法测定液体乳中青霉素族抗生素的方法。采用乙腈：水作为提取剂,旋转蒸发浓缩,0.05 mol/L磷酸盐缓冲溶液（pH=8.5）溶解浓缩物,WATERS Oasis HLB固相萃取小柱净化,HPLC-MS-MS测定,外标法定量。结果表明,10种青霉素具有良好的分离,回收率满足GB/T 27404-2008要求,在10～100范围呈良好线性,相关系数大于0.9955。检测了各类液体乳中的10种青霉素残留量,效果良好。