【摘 要】
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目的构建介导血管生长素(Angiogenin,ANG)短发夹RNA(ShorthairpinRNA,shRNA)表达的真核质粒载体,研究RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术对食管癌细胞株TE-1中ANG表达的抑制
【机 构】
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第二军医大学长海医院胸心外科,济南军区心血管病研究所
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目的构建介导血管生长素(Angiogenin,ANG)短发夹RNA(ShorthairpinRNA,shRNA)表达的真核质粒载体,研究RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术对食管癌细胞株TE-1中ANG表达的抑制作用。方法依据Tuschl等设计原则,以ANG为靶基因设计并合成有小发夹结构的两条DNA片段序列,经退火成互补双链,再克隆到载体pRNA-H1.1/Neo中构建重组质粒pRNA-H1.1/Neo-ANGshRNA。脂质体法转染重组质粒至食管癌TE-1细胞,以空质粒(pRNA-H1.1/Neo)转染为对照;半定量RT-PCR法及蛋白质印迹法分别观察TE-1细胞中ANG在核酸和蛋白水平表达量改变。结果①成功构建带ANG靶向的shRNA真核表达载体(pRNA-H1.1/Neo-ANGshRNA);②pRNA-H1.1/Neo-ANGshRNA转染TE-1细胞后,ANG在核酸和蛋白水平表达均较空载体pRNA-H1.1/Neo转染的对照组显著下降。结论成功构建真核表达质粒介导的ANG靶向RNA干扰重组质粒,转染TE-1细胞后能有效抑制ANG表达,为下一步利用RNAi技术抑制肿瘤血管形成以及局部侵袭和远处转移提供研究基础。
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