【摘 要】
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目的 应用汉逊酵母表达系统进行肠道病毒71型（EV71）病毒样颗粒（VLP）的表达。方法将经过汉逊酵母密码子优化的人EV71的P1和3CD基因片段克隆到汉逊酵母表达载体PMV上，获得重组表达质粒PMV．P1-3CD，转化汉逊酵母宿主菌AU0501，PCR方法及稳定传代培养筛选整合P1和3CD基因的重组菌株。重组菌种接种在含有1％甲醇的培养基中进行诱导表达，对表达产物进行SDS．PAGE、Weste
【机 构】
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天津科技大学生物工程学院,300457,北京民海生物科技有限公司研发中心,102600,北京民海生物科技有限公司研发中心,102600,北京民海生物科技有限公司研发中心,102600,北京民海生物科技
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目的 应用汉逊酵母表达系统进行肠道病毒71型（EV71）病毒样颗粒（VLP）的表达。方法将经过汉逊酵母密码子优化的人EV71的P1和3CD基因片段克隆到汉逊酵母表达载体PMV上，获得重组表达质粒PMV．P1-3CD，转化汉逊酵母宿主菌AU0501，PCR方法及稳定传代培养筛选整合P1和3CD基因的重组菌株。重组菌种接种在含有1％甲醇的培养基中进行诱导表达，对表达产物进行SDS．PAGE、Western blot检测。挑选优胜表达菌株进行30L发酵罐发酵培养，发酵产物经过粗略纯化后进行电镜分析。结果筛选获得EV71重组表达菌株；SDS-PAGE检测结果显示在相对分子质量（M，）为26×10^3、33×10^3、35×10^3处有明显的VP3、VP1、VP0蛋白条带，M大小与预期的目的蛋白大小一致；Western blot检测结果显示表达产物与EV71-VP1单克隆抗体在犯为33×10^3处有较为明显的VPl反应条带，表达产物具有良好的免疫反应性；表达菌株发酵表达量可达200mg／L，电镜分析可见24～30nin的VLP，且颗粒结构完好。结论应用汉逊酵母表达系统成功表达了EV71VLP，为今后研制EV71VLP疫苗奠定基础。
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