探讨MicroRNA-96(miR-96)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖和迁移的影响。
方法:实验研究。通过RNA原位杂交检测人胚胎眼(20周)石蜡切片中RPE层miR-96的表达情况。将miR-96和随机序列寡核苷酸链[阴性对照(NC)]通过阳离子脂质体介导转染人眼RPE细胞,采用细胞增殖实验(MTS)、流式细胞术和Transwell实验分别检测细胞增殖、细胞周期以及细胞迁移能力。通过生物信息学及Western blot法确定miR-96作用的靶基因。应用Western blot检测miR-96对细胞增殖迁移相关信号通路蛋白(Akt、ERK)及细胞周期相关蛋白(p-Cdc2、CyclinD2、p-Rb)表达的影响。组间数据比较采用独立样本t检验。
结果:miR-96在人眼RPE细胞中有表达。MTS结果显示,转染NC、miR-96后,人眼RPE细胞的相对增殖速率分别为100%、74%±2%,差异有统计学意义(t=42.174,P=0.002)。流式细胞术检测结果显示,转染miR-96后阻滞在G1期的RPE细胞明显多于转染NC后,且差异有统计学意义(t=-18.444,P=0.003)。Transwell实验结果显示,与转染NC相比,转染miR-96能显著抑制RPE细胞的迁移,差异具有统计学意义(t=6.754,P=0.002)。进而,明确了MITF是miR-96作用的靶基因。Western blot检测结果显示,转染miR-96后细胞中细胞周期相关蛋白p-Rb(t=11.211,P=0.002)、p-Cdc2(t=9.133,P=0.003)、CyclinD2(t=7.542,P=0.005)以及迁移相关信号通路蛋白p-ERK(t=16.699,P<0.001)、p-Akt(t=23.552,P<0.001)的表达水平均降低。
结论:miR-96通过作用于靶基因MITF,调控细胞周期和迁移相关蛋白的表达从而抑制人RPE细胞的增殖和迁移。