【摘 要】
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为了获得卵形鲳鲹血清免疫球蛋白(Ig M),笔者首先采用硫酸铵二次盐析法对Ig M进行粗提,然后利用蛋白A亲和层析法进行纯化,并以纯化后的Ig M蛋白为抗原,制备该蛋白的多克隆抗
【机 构】
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海南大学海洋学院/海南省热带水生生物技术重点实验室/海南省南海海洋资源利用国家重点实验室;
【基金项目】
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海南省重大项目(ZDKJ2016011));海南省博士后科学基金(BSH-RST-2018001);国家自然科学基金项目(31702379,31560725)
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为了获得卵形鲳鲹血清免疫球蛋白(Ig M),笔者首先采用硫酸铵二次盐析法对Ig M进行粗提,然后利用蛋白A亲和层析法进行纯化,并以纯化后的Ig M蛋白为抗原,制备该蛋白的多克隆抗体,最后利用酶联免疫吸附(ELISA)方法和Western blot技术检测所获抗血清的效价及效果。结果表明:用饱和硫酸铵二次盐析法提取的蛋白除了重链和轻链2条电泳带外,杂蛋白较多;利用蛋白A亲和层析法可获得纯度较高的Ig M重链和轻链。用纯化的卵形鲳鲹Ig M免疫小鼠,ELISA方法检测获得的多抗血清效价高达1∶25 600。Western blot结果显示,本实验制备的鼠抗卵形鲳鲹Ig M血清可结合显示出目标条带,说明卵形鲳鲹Ig M多克隆抗血清制备成功,为卵形鲳鲹的后续研究工作奠定了基础。
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