目的明确苦参总黄酮抗菌活性的化学成分,建立高效液相色谱法同时测定7种黄酮成分的方法。方法采用硅胶柱、ODS柱色谱等方法进行分离纯化,综合理化性质和波谱学数据进行结构鉴定。HPLC同时测定7种黄酮成分,采用Dikma C18色谱柱,甲醇-水梯度洗脱,检测波长280 nm。结果从苦参总黄酮抗菌提取物中分离鉴定7个化合物,分别为苦参啶(1)、槐属二氢黄酮G(2)、苦参酮(3)、异脱水淫羊藿素(4)、异黄腐醇(5)、芒柄花素(6)和三叶豆紫檀苷(7)。上述7种成分依次在质量浓度8.70~87.00、44.25~442.50、128.10~1 281.00、9.40~94.00、48.40~484.00、14.20~142.00、25.70~257.00μg·m L-1内线性关系良好,r值均大于0.999 0,加样回收率均符合要求。其中,苦参酮、异黄腐醇、槐属二氢黄酮G含量相对高,分别占提取物的(16.24±0.02)%、(7.60±0.02)%、(6.59±0.03)%。结论苦参总黄酮抗菌作用的主要化学成分可能是苦参酮、异黄腐醇、槐属二氢黄酮G等。所建立的HPLC测定法简便、准确,可用于同时测定苦参总黄酮中7种成分。