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【摘要】 目的 建立高效液相色谱法进行质量控制。方法 采用反相高效液相色谱法，柱，以甲醇-水（80：20）为流动相，流速。结果 丹参酮ⅡΑ在0.0258-0.2322μg·mL-1范围内呈良好线性，r=1.00000，方法平均回收率为95.65%，RSD为0.34%。结论 方法简便，准确，重复性好，适用于复方肾炎胶囊的质量控制。为0.8mL·min-1，检测波长270nm。
【关键词】 复方肾炎胶囊；丹参酮ⅡΑ；HPLC；含量测定
丹参为该处方中君药之一。丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎，主要含有结晶性菲醌类化合物：丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡΑ、丹参酮ⅡB等。具有袪瘀止痛、活血调经等功效，与本品的功能主治密切相关，我们选择高效液相色谱法测定含量进行控制，具有合理性。
我们参考《中国药典》2010年版一部中丹参的含量测定方法，对丹参中其有效成分丹参酮ⅡΑ的含量进行了测定，方法易于操作，结果准确，重现性良好[1]。
1 仪器与试药
美国安捷伦Agilent1200RRLC高效液相色谱仪，本岛津UV-2450紫外-可见分光光度计。大黄素对照品批号：110756-200110，甲醇为色谱纯，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：DimensionsC18（250mm×4.6mm；5μm）色谱柱；流动相：甲醇-水（80：20）；流速：0.8mL.min-1，柱温25℃；检测波长为270nm；进样量：10μL理论板数按丹参酮ⅡΑ峰计算应不低于5000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取丹参酮ⅡΑ对照品适量，加甲醇制成每1ml含丹参酮ⅡΑ 10μg，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品装量差异项下的内容物，混匀，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 为进一步考察试验的合理性，按处方比例制成不含丹参的阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。
以正文所述方法进行测定。结果表明，阴性样品色谱在与丹参酮ⅡΑ相应的保留时间附近无干扰峰检出，从而证明本方法是合理可行的。
2.3 系统适用性试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μL，注入液相色谱仪中，记录色谱，在相同的色谱条件下，样品中丹参酮ⅡΑ峰与各相邻成分峰能有较好的分离效果，阴性对照溶液无干扰，见图1。
2.4 线性关系的考察 精密称取丹参酮ⅡΑ对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，分别精密吸取1、3、5、7、9μL的系列浓度，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品溶液进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标作标准曲线，得回归方程：Y=3959866.3X-103495，r=1.00000。
结果表明丹参酮ⅡΑ0.0258-0.2322μg范围内线性关系良好。
2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μl，按上述条件重复进样6次，峰面积RSD为0.05%，结果表明，所用的仪器具良好的精密性。
2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，按上述色谱条件于0，2，4，8，12h分别进样10μl，测定色谱峰面积，RSD为0.20%，说明供试品溶液在12h内稳定。
2.7 重复性试验 取同一批号（201300901）复方肾炎胶囊样品6份，依法制备供试品溶液，测定丹参酮Ⅱ的平均含量为0.309mg/粒，RSD为0.34%，结果表明本法具有良好的重复性。
2.8 回收率试验 精密称取已知含量的供试品0.5g（批号：20130901含量0.307mg/粒）5份，分别精密加入一定量的对照品溶液（0.014mg/ml）25ml，照含量测定方法测定，计算回收率，结果见表1。
2.9 样品测定结果及限度确定 取三批的供试品，按供试品溶液制备方法处理并测定，结果见表2。
3 讨论
3.1 提取方法的筛选
3.1.1 超声提取1小时 回流提取1小时；含量测定结果表明，采用回流提取1小时样品有效成分含量较高。
3.1.2 溶媒加入量的选择 25ml甲醇；50ml甲醇；含量测定结果表明结果表明，50ml甲醇对有效成分的提取充分，有效成分的稳定性及重现性均较好。
3.2 检测波长的选择 取丹参酮ⅡΑ对照品溶液进行紫外扫描，经UV-260紫外分光光度计在200-400nm范围内扫描，丹参酮ⅡΑ在270±1nm处，有最大吸收峰，故选择270nm为本实验的测定波长[3]。
3.3 取丹参酮ⅡΑ对照品溶液进行紫外扫描 经UV-260紫外分光光度计在200-400nm范围内扫描，丹参酮ⅡΑ在270±1nm处，有最大吸收峰（见图1），故选择270nm为本实验的测定波长[2]。
参考文献
[1] 中国药典[S].一部.2010.
[2] 陈发奎.常用中草药有效成分含量测定.
[3] 中华人民共和国国家药品监督局（标准WS-10114（ZD-0114）-2002）125.
【关键词】 复方肾炎胶囊；丹参酮ⅡΑ；HPLC；含量测定
丹参为该处方中君药之一。丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎，主要含有结晶性菲醌类化合物：丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡΑ、丹参酮ⅡB等。具有袪瘀止痛、活血调经等功效，与本品的功能主治密切相关，我们选择高效液相色谱法测定含量进行控制，具有合理性。
我们参考《中国药典》2010年版一部中丹参的含量测定方法，对丹参中其有效成分丹参酮ⅡΑ的含量进行了测定，方法易于操作，结果准确，重现性良好[1]。
1 仪器与试药
美国安捷伦Agilent1200RRLC高效液相色谱仪，本岛津UV-2450紫外-可见分光光度计。大黄素对照品批号：110756-200110，甲醇为色谱纯，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：DimensionsC18（250mm×4.6mm；5μm）色谱柱；流动相：甲醇-水（80：20）；流速：0.8mL.min-1，柱温25℃；检测波长为270nm；进样量：10μL理论板数按丹参酮ⅡΑ峰计算应不低于5000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取丹参酮ⅡΑ对照品适量，加甲醇制成每1ml含丹参酮ⅡΑ 10μg，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品装量差异项下的内容物，混匀，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 为进一步考察试验的合理性，按处方比例制成不含丹参的阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。
以正文所述方法进行测定。结果表明，阴性样品色谱在与丹参酮ⅡΑ相应的保留时间附近无干扰峰检出，从而证明本方法是合理可行的。
2.3 系统适用性试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μL，注入液相色谱仪中，记录色谱，在相同的色谱条件下，样品中丹参酮ⅡΑ峰与各相邻成分峰能有较好的分离效果，阴性对照溶液无干扰，见图1。
2.4 线性关系的考察 精密称取丹参酮ⅡΑ对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，分别精密吸取1、3、5、7、9μL的系列浓度，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品溶液进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标作标准曲线，得回归方程：Y=3959866.3X-103495，r=1.00000。
结果表明丹参酮ⅡΑ0.0258-0.2322μg范围内线性关系良好。
2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μl，按上述条件重复进样6次，峰面积RSD为0.05%，结果表明，所用的仪器具良好的精密性。
2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，按上述色谱条件于0，2，4，8，12h分别进样10μl，测定色谱峰面积，RSD为0.20%，说明供试品溶液在12h内稳定。
2.7 重复性试验 取同一批号（201300901）复方肾炎胶囊样品6份，依法制备供试品溶液，测定丹参酮Ⅱ的平均含量为0.309mg/粒，RSD为0.34%，结果表明本法具有良好的重复性。
2.8 回收率试验 精密称取已知含量的供试品0.5g（批号：20130901含量0.307mg/粒）5份，分别精密加入一定量的对照品溶液（0.014mg/ml）25ml，照含量测定方法测定，计算回收率，结果见表1。
2.9 样品测定结果及限度确定 取三批的供试品，按供试品溶液制备方法处理并测定，结果见表2。
3 讨论
3.1 提取方法的筛选
3.1.1 超声提取1小时 回流提取1小时；含量测定结果表明，采用回流提取1小时样品有效成分含量较高。
3.1.2 溶媒加入量的选择 25ml甲醇；50ml甲醇；含量测定结果表明结果表明，50ml甲醇对有效成分的提取充分，有效成分的稳定性及重现性均较好。
3.2 检测波长的选择 取丹参酮ⅡΑ对照品溶液进行紫外扫描，经UV-260紫外分光光度计在200-400nm范围内扫描，丹参酮ⅡΑ在270±1nm处，有最大吸收峰，故选择270nm为本实验的测定波长[3]。
3.3 取丹参酮ⅡΑ对照品溶液进行紫外扫描 经UV-260紫外分光光度计在200-400nm范围内扫描，丹参酮ⅡΑ在270±1nm处，有最大吸收峰（见图1），故选择270nm为本实验的测定波长[2]。
参考文献
[1] 中国药典[S].一部.2010.
[2] 陈发奎.常用中草药有效成分含量测定.
[3] 中华人民共和国国家药品监督局（标准WS-10114（ZD-0114）-2002）125.