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目的
探讨β-连环蛋白抑制基因2(DACT2)过表达对H9C2心肌细胞心力衰竭标志物的调控作用及其分子机制。
方法以Ad-DACT2-绿色荧光蛋白(GFP)及其对照空载体Ad-CON177-GFP腺病毒液感染H9C2心肌细胞后，利用荧光显微镜观察H9C2心肌细胞的感染效率；利用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测DACT2过表达效率；RT-qPCR检测DACT2过表达后心力衰竭标志物α-肌球蛋白重链(α-MHC)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、心房利钠肽(ANP)、脑利钠肽(BNP)和心钠素(ANF)的表达改变；Western blot检测DACT2过表达后Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)和转化生长因子-β(TGF-β)/Smad通路关键蛋白表达变化。两组间比较采用独立样本t检验。
结果绿色荧光显示细胞感染成功；与空载组比较，DACT2过表达组的mRNA和蛋白水平均明显增加(t＝11.291，t＝31.469，P<0.01)，提示过表达模型构建成功；心力衰竭标志物α-MHC(t＝3.922，P<0.05)、ANP(t＝5.895，P<0.01)、BNP(t＝30.195，P<0.01)和ANF(t＝8.074，P<0.01)的表达水平明显降低，β-MHC(t＝1.553，P>0.05)的表达水平无明显变化；DACT2过表达后Smad4的表达(t＝9.510，P<0.05)明显上调，其他因子的表达无显著改变。
结论DACT2通过上调Smad4抑制心力衰竭标志物的表达。