【摘 要】
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目的:探索制备免疫不育疫苗的新途径, 获得草原兔尾鼠卵透明带3(LZP3)重组腺病毒减毒活疫苗.方法:将LZP3基因亚克隆到穿梭质粒pShuttle-CMV上, 采用细菌内同源重组"两步转化
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目的:探索制备免疫不育疫苗的新途径, 获得草原兔尾鼠卵透明带3(LZP3)重组腺病毒减毒活疫苗.方法:将LZP3基因亚克隆到穿梭质粒pShuttle-CMV上, 采用细菌内同源重组"两步转化法"构建携带LZP3基因的重组腺病毒载体.获得的重组腺病毒载体线性化后转染HEK293细胞, 包装成病毒颗粒.PCR鉴定重组腺病毒, 继而用鉴定正确的重组腺病毒感染HeLa细胞, 并以RT-PCR、 Western blot检测LZP3的转录和表达.结果:成功构建了携带LZP3基因的重组腺病毒pAd-LZP3载体, 其转染293细胞后包装出重组病毒, PCR证实LZP3基因已整合至腺病毒基因组中, 病毒的滴度可达1.2×1010 pfu/L.RT-PCR和Western blot检测表明RAd-LZP3感染的HeLa细胞中LZP3基因能够有效转录和表达.结论:制备的RAd-LZP3可成功表达LZP3基因, 为后续开展RAd-LZP3免疫动物的研究奠定了基础.
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