【摘 要】
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目的 探索番泻苷A (Sennoside A, SA) 对前列腺癌细胞LNCap的自噬性死亡的影响及其作用机制研究.方法 体外培养前列腺癌细胞LNCap, 采用不同浓度SA (5、 10、 20 μmol/L) 处
【机 构】
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西安交通大学第一附属医院检验科 西安市, 710061西安交通大学第一附属医院检验科 西安市 710061;西安交通大学医学部基础医学院生理与病理生理系 西安市, 710061;
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目的 探索番泻苷A (Sennoside A, SA) 对前列腺癌细胞LNCap的自噬性死亡的影响及其作用机制研究.方法 体外培养前列腺癌细胞LNCap, 采用不同浓度SA (5、 10、 20 μmol/L) 处理, CCK-8法检测细胞存活率及增殖情况, FCM法检测细胞凋亡率, 免疫荧光检测细胞中LC3分布情况, Western印迹检测凋亡相关蛋白、自噬蛋白以及磷酸化JAK激酶2/磷酸化信号转导与转录因子3 ( JAK2/STAT3) 信号传导途径相关蛋白水平; 体内通过皮下注射前列腺癌细胞LNCap建立移植瘤裸鼠模型并给予不同剂量SA [5、 10、 20 mg/ (kg·d)] 腹腔注射给药, 连续给药3周, 测量给药后肿瘤质量, 免疫组化检测增殖细胞核抗原 (Ki67 antigen, Ki67)、半胱氨酸蛋白酶-3 ( Caspase-3) 水平, Western印迹检测肿瘤组织自噬相关蛋白与JAK2、 STAT3水平.结果 与Ctrl组比较, 随着SA浓度增加, LNCap细胞的存活率、增殖率降低, LNCap细胞凋亡率增加, Ki67、增殖细胞核抗原 ( PCNA) 水平降低, 而Caspase-3、 Caspase-9 水平增加;免疫荧光检测结果显示与Ctrl组比较, 随着SA浓度增加LNCap细胞中LC3分布越多; 裸鼠移植瘤体内试验结果显示与Ctrl相比, 随着SA剂量增加, 肿瘤质量逐渐降低, Ki67 含量降低, 而caspase-3 水平增加;体外与体内Western印迹检测结果显示与Ctrl组比较, 自噬基因 ( Beclin1)、自噬体膜蛋白微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ/自噬体膜蛋白微管相关蛋白1 轻链3-Ⅰ ( LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ) 水平随着 SA浓度增加而升高, 而p62、 P-JAK2、 P-STAT3及c-Myc水平随着SA浓度增加而降低.结论 SA可以通过抑制JAK2/STAT3信号传导、上调促自噬与凋亡蛋白水平, 从而促进前列腺细胞LNCap自噬死亡.
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