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建立了同时检测海产品中土霉素、四环素、金霉素、氯霉素残留的高效液相色谱分析方法，以醋酸铵-醋酸／水缓冲液和乙腈作为流动相，通过二元梯度洗脱，使四种抗生素获得了较好的分离，以基线噪音的3倍计算，土霉素、四环素、金霉素、氯霉素的最低检出浓度分别为32、15、23、19vg／kg，在添加浓度范围内，四种抗生素的加标回收率为76％～92％，相对标准偏差为0．8％～4．5％，该方法快速、灵敏、准确，可靠性高，可用于海产品中抗生素残留的色谱分析。