论文部分内容阅读
摘要 [目的] 研究不同中草藥对凡纳滨对虾生长和抗病的影响，为对虾的健康养殖提供科学依据。[方法] 将黄芪、板蓝根、柴胡、甘草和茯苓经超微粉碎后，分别添加1.5%到基础饲料中，饲喂凡纳滨对虾35 d， 研究其对凡纳滨对虾的生长、成活率、饲料系数、消化酶活力、非特性免疫指标及感染WSSV后的抗病力的影响。[结果] 各组凡纳滨对虾的增重率和特定生长率大小顺序均为茯苓组>黄芪组>甘草组>柴胡组>板蓝根组>对照组。各组饵料系数的大小顺序为茯苓组<黄芪组<甘草组<柴胡组<板蓝根组<对照组。各组对虾存活率的大小顺序为板蓝根组>柴胡组>甘草组>黄芪组>茯苓组>对照组。不同中草药对凡纳滨对虾肝胰腺消化酶活性的影响不同。各组淀粉酶大小顺序为茯苓组>甘草组>黄芪组>板蓝根组>柴胡组>对照组；各组脂肪酶大小顺序为甘草组>茯苓组>黄芪组>对照组>柴胡组>板蓝根组；各组蛋白酶大小顺序为茯苓组>黄芪组>甘草组>板蓝根组>对照组>柴胡组。5种中草药对凡纳滨对虾肝胰腺非特异性免疫力有影响，其中黄芪组和甘草组对虾的AKP、ACP、POD和SOD活力较高。感染WSSV后，各组凡纳滨对虾的半致死时间顺序为柴胡组>板蓝根组>黄芪组>甘草组>茯苓组>对照组，各组存活率大小顺序为柴胡组>黄芪组>板蓝根组>甘草组>茯苓组>对照组。[结论] 中草药制剂可以明显提高凡纳滨对虾的生长和抗病力。其中，茯苓的促生长作用较佳，而黄芪、板蓝根、柴胡和甘草可以明显提高其抗病力。
关键词中草药；凡纳滨对虾；生长；消化酶；免疫酶；WSSV
中图分类号S945.4+9文献标识码
A文章编号0517-6611（2016）01-086-05
Abstract [Objective] To study the effects of different Chinese herb on the growth and diseaseresistance of Litopennaus vannamei and provide scientific basis for the healthy culture of L. vannamei. [Method] 1.5% Astraogalus membranaceus var. mongholicus， Isatis indigotica Fortune， Bupleurum chinense， Glycyrrhiza uralensis Fisch and Wolfiporia cocos were added in the basal diet after superfine comminution to feed L. vannamei for 35 d. Their effects on the growth， survival rate， feed coefficient， digestive enzyme activity， nonspecific immune indices， and diseaseresistance after infecting WSSV of L. vannamei were studied. [Result] The weight gain rate and specific growth rate orders of L. vannamei in test groups were W. cocos group>A. membranaceus group>G. uralensis group>B. chinense group>I. indigotica group>control group. The feed coefficient order of L. vannamei in test groups was W. cocos groupB. chinense group>G. uralensis group>A. membranaceus group>W.cocos group>control group. Five species of L. vannamei had different effects on the activities of digestive enzymes in the hepatopancreas of L. vannamei. The amylase activity order of L. vannamei in test groups was W.cocos group>G. uralensis group>A. membranaceus group>I. indigotica group>B. chinense group>control group. The lipase activity order of L. vannamei in test groups was G. uralensis group>W.cocosgroup>A. membranaceus group>control group>B. chinense group>I. indigotica group. The protease activity order of L. vannamei in test groups was W.cocos group>A. membranaceus group>G. uralensis group>I. indigotica group>control group>B. chinense group. Five species of L. vannamei influenced the nonspecific immune indices of L. vannamei. The actives of AKP， ACP， POD and SOD in L. vannamei in A. membranaceus group and G. uralensis group were higher. The median lethal time order of L. vannamei infected with WSSV in test groups was B. chinense group>I. indigotica group>A. membranaceus group>G. uralensis group>W. cocos group>control group. The survival rate order of L. vannamei in test groups was B. chinense group>A. membranaceus group>I. indigotica group>G. uralensis group>W.cocos group>control group. [Conclusion] Chinese herbal preparations can significantly improve the growth and diseaseresistance of L. vannamei. Among these Chinese herbs， the growthpromoting effect of W.cocos is the best， and A. membranaceus， I. indigotica， B. chinense and G. uralensis can significantly improve the diseaseresistance of L. vannamei.
Key words Chinese herbs； Litopenaeus vannamei； Growth； Digestive enzyme； Immune enzyme； WSSV
凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）俗称南美白对虾，是世界三大养殖虾类品种之一。由于生长迅速、抗逆性强、出肉率高、耐高密度和低盐度养殖，使得该种虾养殖产量占虾类总产量的80%以上，已成为我国主要的对虾养殖品种。随着虾养殖规模的不断扩大、集约化程度的提高以及虾生存环境的恶化，疾病的危害程度越来越大。特别是对虾白斑综合症病毒 （White spot syndrome virus，WSSV）是迄今为止危害最为严重的一种对虾病毒，感染虾7～10 d内死亡率可达80%～100%[1]。养殖生产上使用抗生素和其他化学类药物来防治，容易打破生物间相互依赖、相互制约的生态平衡，抑制有益藻类的繁殖给对虾健康养殖带来了严重后果。
中草药具有天然、高效、毒副作用小、不易产生抗药性等特点，且药中某些成分既有抗菌作用又有免疫作用，能改善机体的免疫状态和提高自身抗病能力，在水产养殖中的应用越来越受到关注[2-3]。目前，Kumaran T等[4]、Balasubramanian G等[5]、Yogeeswaran A等[6]和Balasubramanian等[7-8]研究发现采用中草药提取物投喂斑节对虾（Penaeus monodon）可以显著增强其对 WSSV 侵染的抵抗力。郭志勋等[9]和阴晓丽等[10]研究发现番石榴（Psidium guajava L.）叶水提取物对WSSV 有一定的杀灭作用。另外，杨清华等[11] 和吴俊文[12]研究表明在饲料中添加复方中草药投喂凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）可以提高对虾对 WSSV 的抗病能力。笔者将黄芩、黄芪、板蓝根、柴胡、茯苓和甘草5种中草药超微粉碎后分别以相同质量分数量加入到对虾基础饲料中，比较各种中草药在对虾抗WSSV的效果，为对虾健康养殖提供科学依据。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1中草药。5种中草药（黄芪、板蓝根、柴胡、甘草和茯苓）干燥超微粉碎后分别以质量分数的1.5%加入到基础饲料中。
1.1.2试验材料。从漳浦养虾场购买健康凡纳滨对虾2 000尾，体长（2.36±0.42）cm，体质量（0.35±0.11）g。
1.1.3试验饲料。
试验用基础饲料组成为优质鱼粉、虾壳粉、面粉、豆粕、酵母粉、多矿、多维、诱食剂等，在此基础上添加中草药制剂，添加量分别为1.5 g/kg。饲料主要营养水平为粗蛋白42.50%，粗脂肪6.5%，粗灰分10.2%，水分86%，钙2.2%，磷1.0%。
1.2方法
1.2.1生长试验。对虾经暂养7 d后，分为对照组和5个中草药组（黄芪、板蓝根、柴胡、甘草和茯苓），每组3个重复，每个重复60尾对虾，放置在200 L实验桶中，适应 3 d后分别投喂基础饲料和5种添加中草药的试验饲料。日投喂量按体重的3%～5%，分3次（7：30、14：00、19：30）投喂，每天换水10%～15%，全程充氧，水温为（27.1±1.2） ℃，盐度为 28‰，养殖试验持续35 d。试验结束时，对每个桶中的对虾进行称重，并按照以下公式计算增重率、特定生长率、饲料系数和存活率：
增重率（WGR， %） = （Wt-Wo）/Wo×100（1）
特定生长率（SGR， %/d） = （lnWt-lnWo）/t×100（2）
饲料系数（FCR） = F/（Wt-Wo）（3）
存活率（SR， %） = Nt/No×100（4）
式中，Wt和Wo分别为鱼的终末体重（g）和初始体重（g）；t为试验天数（d）；Nt和No分别为t天后和初始鱼的尾数；F为t天内摄食的饲料量（g）。
1.2.2消化酶及血清免疫酶的活性测定。
饲养满35 d后对试验对虾饥饿24 h，每桶随机抽取 10 尾（每组3桶）进行解剖，取肝胰脏组织立即投入-196 ℃液氮中，转移至实验室放置于-80 ℃冰箱中保存待测。
消化酶及免疫酶的活性测定将解冻后的肝胰腺称重，加入10倍体积（V/W）的预冷生理盐水，在冰水浴中匀浆5 min。采用低温高速离心机（4 ℃， 4 000 r/min， 20 min）對匀浆液进行离心，吸取上清，即为粗酶液。淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶活性及氧化物歧化酶（SOD）、酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、过氧化物酶（POD）的活性和总蛋白（TP）含量均使用南京建成生物工程研究所生产的相应试剂盒测定。
1.2.3感染试验。试验结束后，每桶随机抽取 30 尾（每组3桶），投喂经检测感染 WSSV的新鲜病虾，剁碎后按体重的5%～10%投喂，每天正常投喂、吸污、换水，定时检查虾的活动情况，及时收集、编号、保存（-80 ℃）死亡对虾，计算存活率。
1.3数据统计与分析
采用 SPSS 11.5统计软件对数据进行统计与分析，先对试验数据进行单因素方差分析（ANOVA），并进行 Duncan’s多重比较法分析平均数的差异显著性（P<0.05）。
2结果与分析
2.1中草药对凡纳滨对虾的生长、 成活率和饲料系数的影响
由表1可知，不同中草药对凡纳滨对虾的生长、成活率和饲料系数的影响不同。从增重率来看，茯苓组>黄芪组>甘草组>柴胡组>板蓝根组>对照组，其中黄芪组与甘草组以及柴胡组、板蓝根组和对照组之间差异不显著（P>0.05）外，其他组差异显著（P<0.05）。各组特定生长率大小为茯苓组>黄芪组>甘草组>柴胡组>板蓝根组>对照组，其中黄芪组与甘草组以及柴胡组、板蓝根组和对照组之间差异不显著（P>0.05）外，其他组差异显著（P<0.05）。各组的饲料系数的大小为茯苓组<黄芪组<甘草组<柴胡组<板蓝根组<对照组，其中茯苓组、黄芪组和甘草组以及柴胡组、板蓝根组和对照组之间差异不显著（P>0.05）外，其他组差异显著（P<0.05）。各组凡纳滨对虾的成活率大小为板蓝根组>柴胡组>黄芪组>甘草组>茯苓组>对照组，除对照组之间差异不显著（P>0.05），其他组差异显著（P<0.05）。 2.2中草药对凡纳滨对虾消化酶活力的影响
由表2可知，不同中草药对凡纳滨对虾肝胰腺消化酶活性的影响不同。从淀粉酶活性来看，各组淀粉酶活性大小为茯苓组>甘草组>黄芪组>板蓝根组>柴胡组>对照组，除茯苓组与其他组差异显著（P<0.05）外，黄芪组和甘草组以及柴胡组、板蓝根组和对照组之间差异不显著（P>0.05）。各组脂肪酶活性大小为甘草组>茯苓组>黄芪组>对照组>柴胡组>板蓝根组，其中茯苓组和甘草组以及黄芪组、柴胡组、板蓝根组和对照组之间差异不显著（P>0.05）外，其他组差异显著（P<0.05）。各组蛋白酶活性大小为茯苓组>黄芪组>甘草组>板蓝根组>对照组>柴胡组，其中黄芪组和甘草组以及柴胡组、板蓝根组和对照组之间差异不显著（P>0.05），其他组差异显著（P<0.05）。
2.3中草药对凡纳滨对虾非特性免疫指标的影响
由表3可知，中草药影响凡纳滨对虾肝胰腺非特异性免疫力。从SOD活性来看，各组SOD活性大小顺序为板蓝根组>柴胡组>黄芪组>甘草组>茯苓组>对照组，其中板蓝根组、柴胡组、黄芪组和甘草组以及茯苓组和对照组之间差异不显著（P>0.05），其他组差异显著（P<0.05）。各组AKP活性大小顺序为板蓝根组>甘草组>黄芪组>柴胡组>茯苓组>对照组，其中板蓝根组、甘草组、黄芪组和柴胡组之间差异不显著（P>0.05），其他组差异显著（P<0.05）。各组ACP活性大小顺序为板蓝根组>甘草组>黄芪组>对照组>柴胡组>茯苓组，各组之间差异不显著（P>0.05）。各组POD活性大小顺序为板蓝根组>黄芪组>甘草组>柴胡组>茯苓组>对照组，其中板蓝根组、柴胡组、黄芪组和甘草组之间差异不显著（P>0.05），其他组差异显著（P<0.05）。
2.4中草药制剂对凡纳滨对虾抗病力的影响
由表4可知，经过感染试验后，各组凡纳滨对虾的半致死时间大小为柴胡组>板蓝根组>黄芪组>甘草组>茯苓组>对照组，柴胡组、板蓝根组、黄芪组、甘草组和茯苓组半致死时间分别比对照组延长了35.50、34.17、29.87、29.34和4.47 h，其中板蓝根组、柴胡组、黄芪组和甘草组之间差异不显著（P>005），其他组差异显著（P<0.05）。不同中草药对凡纳滨对虾抗WSSV的效果表现为柴胡组>黄芪组>板蓝根组>甘草组>茯苓组>对照组，柴胡组、黄芪组、板蓝根组、甘草组和茯苓组凡纳滨对虾的存活率与对照组相比分别提高536%、5.22%、5.04%、3.22%和1.25%，其中板蓝根组、柴胡组和黄芪组之间差异不显著（P>0.05），其他组差异显著（P<0.05）。
3讨论与结论
中草药作为一种天然物质，具有来源广泛、价格低廉、不宜导致病原菌产生耐药性等优点。目前，已有200 余种中草药具有多种免疫活性且影响和调节动物机体的免疫功能[2]。中草药除含有药用功效的成分外，还含有蛋白质、多糖、脂类、微量元素、维生素等营养成分，因而中草药具有增强机体免疫力、调整机体新陈代谢、增强抗应激能力、抗菌抑菌、促消化吸收、促生长、杀虫驱虫等功能，适合作为免疫增强剂应用于水产养殖业[13-15]。
中草药黄芩（Astraogalus membranaceus var. mongholicus）含有黄芩多糖及甙类等多种微量有益物质，有增强机体免疫功能、促进生长的作用[15-16]；甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch）的主要成分是三萜类化合物（甘草酸、甘草次酸、甘草内酯等）、黄酮化合物（甘草素、甘草醇、甘草利酮、甘草查耳酮等）、糖类、生物碱类、香豆素类等，是一种补益中草药，具有抗炎、抗氧化、抗病毒和抗肿瘤等生理活性[17] ，将黄芪和甘草添加到基础饲料中可以明显增强对虾的免疫性能。该试验中黄芪组和甘草组对虾的AKP、ACP、POD和SOD均表现出较高的活力。板蓝根（Radix isatidis）的有效成分为靛苷、靛红、靛蓝、葡萄糖芸香素、棕榈酸和氨基酸等，具有清热解毒、凉血等功效，对流感病毒、乙型脑炎病毒和腮腺炎病毒有抑制其感染和增殖的作用[18-19]；柴胡（Bupleurum chinense）的有效成分为皂苷、甾醇、挥发油、有机酸、黄酮、多糖等，柴胡具有镇静、止痛、降温、镇咳、抗炎、抗菌、保肝利胆、降血压、抗病毒、抗肿瘤等生理活性[20]。添加在基础饲料中投喂35 d后的攻毒感染试验表明，试验对虾比对照组存活率提高56.41%和5520%。茯苓（Poria）含茯苓多糖、三萜类化合物茯苓素、茯苓聚糖分解酶、脂肪酶及蛋白酶等多种有益物质， 具有促进消化、吸收等功能[15，21]。该研究中茯苓组试验对虾肝胰腺消化酶（淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶）活性明显优于其他组。因此，不同中草药由于其有效成分不同，其发挥的功能也不同，就生长而言茯苓促生长作用较佳，黄芪、板蓝根、柴胡和甘草可以明显提高免疫力和抗病性能。张耀等[22]在饲料中添加中草药黄芪、黄岑（Radix scutellaria）、板兰根、茯苓、鱼腥草（Houttuynia cordata）等药用植物，发现可以通过改善动物肠道内环境，促进有益菌增殖，抑制有害菌的繁殖，从而提高营养物质的消化率；王芸等[23]用鱼腥草、黄芪、大黄（Rheum officinale）、甘草和黄芩的水提取物按质量分数为2%添加在饲料中连续饲养28 d，发现黄芪、大黄和甘草能够促进凡纳滨对虾的生长及非特异性免疫功能，注射鳗弧菌攻毒试验的结果表明黄芪、大黄和甘草的累計死亡率均低于对照组，免疫保护率为 37%～46%；汤菊芬等[24]在饲料中添加黄芪、当归（Angelica sinensis）、陈皮（Citrus reticulata Blanco）、金银花（Lonicera japonica）、板蓝根、连翘（Forsythia suspensa）等6种中草药，结果表明试验组凡纳滨对虾的增重率、成活率、饲料系数、蛋白质效率、抗病力等指标均优于对照组。该研究结果与江湧等[25]、周歧存等[26]和叶建生等[27]中草药制剂对凡纳滨对虾生长和消化酶活性的影响的研究结果相同。 随着对虾养殖规模的不断扩大、集约化程度的提高以及虾生存环境的恶化，疾病的危害程度越来越大，给养虾生产造成了巨大损失，而使用抗生素和其他化学类药物来防治养殖病害，容易引发一系列环境问题和社会问题。为此，利用中草药这一绿色、环保药物和添加剂提高虾体自身非特异性免疫能力和抗病能力，减少渔药使用，生产绿色对虾产品，促进对虾可持续健康发展。该试验结果表明黄芪、板蓝根、柴胡、甘草和茯苓可以明显提高凡纳滨对虾的生长和抗病力，其中茯苓促生长较佳，而黄芪、板蓝根、柴胡和甘草可以明显提高免疫力和抗病性能。
参考文献
[1]
[1]许雅香，许悻荣，鲁兴萌.對虾白斑综合症研究进展[J].中国兽医科技，2002，31（1）：12-14.
[2]王爱萍， 徐今宁. 中药免疫调节作用研究进展 [J].中国药业， 2011， 20（3）： 75-77.
[3]吕永辉，王玉堂.鱼药中的中草药[J].中国水产，2006（7）：91-94.
[4] KUMARAN T，MICHAELBABU M，SELVARAJ T， et al. Production of anti WSSV IgY edible antibody using herbal immuno-adjuvant Asparagus racemosus and its immunological influence against WSSV infection in Penaeus monodon[J]. J Aquac Feed Sci Nutr， 2010， 2（1）： 1-5.
[5] BALASUBRAMANIAN G， SARATHI M， VENKATESAN C， et al. Studies on the immunomodulatory effect of extract of Cyanodon dactylon in shrimp， Penaeus monodon， and its efficacy to protect the shrimp from white spot syndrome virus（WSSV）[J]. Fish shellfish immunol， 2008， 25（6）： 820-828.
[6] YOGEESWARAN A， VELMURUGAN S，PUNITHA S M， et al.Protection of Penaeus monodon against white spot syndrome virus by inactivated vaccine with herbal immunostimulants[J]. Fish shellfish immunol， 2012， 32（6）：1058-1067.
[7] BALASUBRAMANIAN G，SARATHI M，KUMAR S R，et al.Screening the antiviral activity of Indian medicinal plants against white spot syndrome virus in shrimp[J]. Aquaculture，2007， 263（1/2/3/4）： 15-19.
[8] BALASUBRAMANIAN G，SARATHI M，VENKATESAN C，et al. Oral administration of antiviral plant extract of Cynodon dactylon on a large scale production against white spot syndrome virus （WSSV） in Penaeus monodon[J]. Aquaculture，2008， 279（1/2/3/4）： 2-5.
[9] 郭志勋，李卓佳，管淑玉，等.抗对虾白斑综合症（WSSV）中草药的筛选及番石榴叶提取物对WSSV 致病性的影响[J].广东农业科学，2011，38（21）：129-131.
[10] 阴晓丽，李卓佳，管淑玉，等.番石榴叶水提取物抗对虾白斑综合征病毒有效成分初探[J].广东农业科学，2014，41（13）：87-93.
[11] 杨清华，郭志勋，林黑着，等.复方中草药添加浓度和投喂策略对凡纳滨对虾抗WSSV能力的影响[J].黑龙江畜牧兽医，2011（2） ：142-148.
[12] 吴俊文.南美白对虾白斑综合症防治技术探讨[J].吉林农业，2011（3）：259.
[13] 孔庆雷，齐志明，孔繁硅，等.619 种常用中药的元素分析（第一报）[J].中兽医医药杂志，1995（2）：8-10.
[14] 孔庆雷，齐志明，孔繁硅，等.619 种常用中药的元素分析（第二报）[J].中兽医医药杂志，1995（3）：4-7，16.
[15] 杜强，杨兴，吴林菁，等.中草药添加剂在水产养殖中的作用机制及应用前景[J]. 饲料研究，2014（11）：71-73.
[16] 张云龙，樊启学，姚昌林，等. 黄芩对水生动物生长及免疫功能影响的研究进展[J].养殖与饲料，2012（9）：96-98.
[17] 王世锋，徐萍，古丽米热·安外尔，等.甘草对铜胁迫下鲫鱼肝胰脏的抗氧化酶活性及血液红细胞中微核数量的影响[J].水产科学，2014，33（11）：713-717.
[18] 刘俊栋，刘海霞，李建基，等.中药板蓝根抗菌、抗病毒及对免疫系统作用的研究[J].中兽医医药杂志，2005（2）：22-23.
[19] 胡淑平，丁涛，张殿文，等.复方板蓝根含片的抗菌作用及对免疫功能的影响[J].中药药理与临床，2007，23（5）：188-190.
[20] 张锐，陈阿琴，俞颂东，等.柴胡抗炎及免疫药理学研究进展[J].中国兽医杂志，2006，40（3）：28-31.
[21] 刘红柏，张颖，杨雨辉，等. 5种中草药作为饲料添加剂对鲤肠内细菌及生长的影响[J].大连水产学院学报， 2004， 19（1）：16-20.
[22] 张耀，朱伟云.中草药对消化道微生物的影响[J]. 微生物学通报， 2007， 34（3）： 569-571.
[23] 王芸，李健，刘淇，等.5种中草药对凡纳滨对虾生长及非特异性免疫功能的影响[J]. 安徽农业科学， 2007， 35（26）： 8236-8239.
[24] 汤菊芬，陆志款，彭卫正，等.复方中草药对凡纳滨对虾生长、肌肉营养成分和抗病力的影响[J]. 饲料工业，2008，29（20）：23-26.
[25] 江湧，王广军，余德光.中草药添加剂对凡纳滨对虾生长和抗病力影响的研究[J].渔业现代化，2005（4）：35-37.
[26] 周歧存，罗从彦，韩兆红. 复合中草药对凡纳滨对虾生长及抗病力的影响[J]. 饲料研究， 2006（9）：53-56.
[27] 叶建生，马纷，王兴强，等.中草药制剂对凡纳滨对虾生长和消化酶活性的影响[J].中国海洋大学学报，2007，37（S1）：151-154.
关键词中草药；凡纳滨对虾；生长；消化酶；免疫酶；WSSV
中图分类号S945.4+9文献标识码
A文章编号0517-6611（2016）01-086-05
Abstract [Objective] To study the effects of different Chinese herb on the growth and diseaseresistance of Litopennaus vannamei and provide scientific basis for the healthy culture of L. vannamei. [Method] 1.5% Astraogalus membranaceus var. mongholicus， Isatis indigotica Fortune， Bupleurum chinense， Glycyrrhiza uralensis Fisch and Wolfiporia cocos were added in the basal diet after superfine comminution to feed L. vannamei for 35 d. Their effects on the growth， survival rate， feed coefficient， digestive enzyme activity， nonspecific immune indices， and diseaseresistance after infecting WSSV of L. vannamei were studied. [Result] The weight gain rate and specific growth rate orders of L. vannamei in test groups were W. cocos group>A. membranaceus group>G. uralensis group>B. chinense group>I. indigotica group>control group. The feed coefficient order of L. vannamei in test groups was W. cocos group
凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）俗称南美白对虾，是世界三大养殖虾类品种之一。由于生长迅速、抗逆性强、出肉率高、耐高密度和低盐度养殖，使得该种虾养殖产量占虾类总产量的80%以上，已成为我国主要的对虾养殖品种。随着虾养殖规模的不断扩大、集约化程度的提高以及虾生存环境的恶化，疾病的危害程度越来越大。特别是对虾白斑综合症病毒 （White spot syndrome virus，WSSV）是迄今为止危害最为严重的一种对虾病毒，感染虾7～10 d内死亡率可达80%～100%[1]。养殖生产上使用抗生素和其他化学类药物来防治，容易打破生物间相互依赖、相互制约的生态平衡，抑制有益藻类的繁殖给对虾健康养殖带来了严重后果。
中草药具有天然、高效、毒副作用小、不易产生抗药性等特点，且药中某些成分既有抗菌作用又有免疫作用，能改善机体的免疫状态和提高自身抗病能力，在水产养殖中的应用越来越受到关注[2-3]。目前，Kumaran T等[4]、Balasubramanian G等[5]、Yogeeswaran A等[6]和Balasubramanian等[7-8]研究发现采用中草药提取物投喂斑节对虾（Penaeus monodon）可以显著增强其对 WSSV 侵染的抵抗力。郭志勋等[9]和阴晓丽等[10]研究发现番石榴（Psidium guajava L.）叶水提取物对WSSV 有一定的杀灭作用。另外，杨清华等[11] 和吴俊文[12]研究表明在饲料中添加复方中草药投喂凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）可以提高对虾对 WSSV 的抗病能力。笔者将黄芩、黄芪、板蓝根、柴胡、茯苓和甘草5种中草药超微粉碎后分别以相同质量分数量加入到对虾基础饲料中，比较各种中草药在对虾抗WSSV的效果，为对虾健康养殖提供科学依据。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1中草药。5种中草药（黄芪、板蓝根、柴胡、甘草和茯苓）干燥超微粉碎后分别以质量分数的1.5%加入到基础饲料中。
1.1.2试验材料。从漳浦养虾场购买健康凡纳滨对虾2 000尾，体长（2.36±0.42）cm，体质量（0.35±0.11）g。
1.1.3试验饲料。
试验用基础饲料组成为优质鱼粉、虾壳粉、面粉、豆粕、酵母粉、多矿、多维、诱食剂等，在此基础上添加中草药制剂，添加量分别为1.5 g/kg。饲料主要营养水平为粗蛋白42.50%，粗脂肪6.5%，粗灰分10.2%，水分86%，钙2.2%，磷1.0%。
1.2方法
1.2.1生长试验。对虾经暂养7 d后，分为对照组和5个中草药组（黄芪、板蓝根、柴胡、甘草和茯苓），每组3个重复，每个重复60尾对虾，放置在200 L实验桶中，适应 3 d后分别投喂基础饲料和5种添加中草药的试验饲料。日投喂量按体重的3%～5%，分3次（7：30、14：00、19：30）投喂，每天换水10%～15%，全程充氧，水温为（27.1±1.2） ℃，盐度为 28‰，养殖试验持续35 d。试验结束时，对每个桶中的对虾进行称重，并按照以下公式计算增重率、特定生长率、饲料系数和存活率：
增重率（WGR， %） = （Wt-Wo）/Wo×100（1）
特定生长率（SGR， %/d） = （lnWt-lnWo）/t×100（2）
饲料系数（FCR） = F/（Wt-Wo）（3）
存活率（SR， %） = Nt/No×100（4）
式中，Wt和Wo分别为鱼的终末体重（g）和初始体重（g）；t为试验天数（d）；Nt和No分别为t天后和初始鱼的尾数；F为t天内摄食的饲料量（g）。
1.2.2消化酶及血清免疫酶的活性测定。
饲养满35 d后对试验对虾饥饿24 h，每桶随机抽取 10 尾（每组3桶）进行解剖，取肝胰脏组织立即投入-196 ℃液氮中，转移至实验室放置于-80 ℃冰箱中保存待测。
消化酶及免疫酶的活性测定将解冻后的肝胰腺称重，加入10倍体积（V/W）的预冷生理盐水，在冰水浴中匀浆5 min。采用低温高速离心机（4 ℃， 4 000 r/min， 20 min）對匀浆液进行离心，吸取上清，即为粗酶液。淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶活性及氧化物歧化酶（SOD）、酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、过氧化物酶（POD）的活性和总蛋白（TP）含量均使用南京建成生物工程研究所生产的相应试剂盒测定。
1.2.3感染试验。试验结束后，每桶随机抽取 30 尾（每组3桶），投喂经检测感染 WSSV的新鲜病虾，剁碎后按体重的5%～10%投喂，每天正常投喂、吸污、换水，定时检查虾的活动情况，及时收集、编号、保存（-80 ℃）死亡对虾，计算存活率。
1.3数据统计与分析
采用 SPSS 11.5统计软件对数据进行统计与分析，先对试验数据进行单因素方差分析（ANOVA），并进行 Duncan’s多重比较法分析平均数的差异显著性（P<0.05）。
2结果与分析
2.1中草药对凡纳滨对虾的生长、 成活率和饲料系数的影响
由表1可知，不同中草药对凡纳滨对虾的生长、成活率和饲料系数的影响不同。从增重率来看，茯苓组>黄芪组>甘草组>柴胡组>板蓝根组>对照组，其中黄芪组与甘草组以及柴胡组、板蓝根组和对照组之间差异不显著（P>0.05）外，其他组差异显著（P<0.05）。各组特定生长率大小为茯苓组>黄芪组>甘草组>柴胡组>板蓝根组>对照组，其中黄芪组与甘草组以及柴胡组、板蓝根组和对照组之间差异不显著（P>0.05）外，其他组差异显著（P<0.05）。各组的饲料系数的大小为茯苓组<黄芪组<甘草组<柴胡组<板蓝根组<对照组，其中茯苓组、黄芪组和甘草组以及柴胡组、板蓝根组和对照组之间差异不显著（P>0.05）外，其他组差异显著（P<0.05）。各组凡纳滨对虾的成活率大小为板蓝根组>柴胡组>黄芪组>甘草组>茯苓组>对照组，除对照组之间差异不显著（P>0.05），其他组差异显著（P<0.05）。 2.2中草药对凡纳滨对虾消化酶活力的影响
由表2可知，不同中草药对凡纳滨对虾肝胰腺消化酶活性的影响不同。从淀粉酶活性来看，各组淀粉酶活性大小为茯苓组>甘草组>黄芪组>板蓝根组>柴胡组>对照组，除茯苓组与其他组差异显著（P<0.05）外，黄芪组和甘草组以及柴胡组、板蓝根组和对照组之间差异不显著（P>0.05）。各组脂肪酶活性大小为甘草组>茯苓组>黄芪组>对照组>柴胡组>板蓝根组，其中茯苓组和甘草组以及黄芪组、柴胡组、板蓝根组和对照组之间差异不显著（P>0.05）外，其他组差异显著（P<0.05）。各组蛋白酶活性大小为茯苓组>黄芪组>甘草组>板蓝根组>对照组>柴胡组，其中黄芪组和甘草组以及柴胡组、板蓝根组和对照组之间差异不显著（P>0.05），其他组差异显著（P<0.05）。
2.3中草药对凡纳滨对虾非特性免疫指标的影响
由表3可知，中草药影响凡纳滨对虾肝胰腺非特异性免疫力。从SOD活性来看，各组SOD活性大小顺序为板蓝根组>柴胡组>黄芪组>甘草组>茯苓组>对照组，其中板蓝根组、柴胡组、黄芪组和甘草组以及茯苓组和对照组之间差异不显著（P>0.05），其他组差异显著（P<0.05）。各组AKP活性大小顺序为板蓝根组>甘草组>黄芪组>柴胡组>茯苓组>对照组，其中板蓝根组、甘草组、黄芪组和柴胡组之间差异不显著（P>0.05），其他组差异显著（P<0.05）。各组ACP活性大小顺序为板蓝根组>甘草组>黄芪组>对照组>柴胡组>茯苓组，各组之间差异不显著（P>0.05）。各组POD活性大小顺序为板蓝根组>黄芪组>甘草组>柴胡组>茯苓组>对照组，其中板蓝根组、柴胡组、黄芪组和甘草组之间差异不显著（P>0.05），其他组差异显著（P<0.05）。
2.4中草药制剂对凡纳滨对虾抗病力的影响
由表4可知，经过感染试验后，各组凡纳滨对虾的半致死时间大小为柴胡组>板蓝根组>黄芪组>甘草组>茯苓组>对照组，柴胡组、板蓝根组、黄芪组、甘草组和茯苓组半致死时间分别比对照组延长了35.50、34.17、29.87、29.34和4.47 h，其中板蓝根组、柴胡组、黄芪组和甘草组之间差异不显著（P>005），其他组差异显著（P<0.05）。不同中草药对凡纳滨对虾抗WSSV的效果表现为柴胡组>黄芪组>板蓝根组>甘草组>茯苓组>对照组，柴胡组、黄芪组、板蓝根组、甘草组和茯苓组凡纳滨对虾的存活率与对照组相比分别提高536%、5.22%、5.04%、3.22%和1.25%，其中板蓝根组、柴胡组和黄芪组之间差异不显著（P>0.05），其他组差异显著（P<0.05）。
3讨论与结论
中草药作为一种天然物质，具有来源广泛、价格低廉、不宜导致病原菌产生耐药性等优点。目前，已有200 余种中草药具有多种免疫活性且影响和调节动物机体的免疫功能[2]。中草药除含有药用功效的成分外，还含有蛋白质、多糖、脂类、微量元素、维生素等营养成分，因而中草药具有增强机体免疫力、调整机体新陈代谢、增强抗应激能力、抗菌抑菌、促消化吸收、促生长、杀虫驱虫等功能，适合作为免疫增强剂应用于水产养殖业[13-15]。
中草药黄芩（Astraogalus membranaceus var. mongholicus）含有黄芩多糖及甙类等多种微量有益物质，有增强机体免疫功能、促进生长的作用[15-16]；甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch）的主要成分是三萜类化合物（甘草酸、甘草次酸、甘草内酯等）、黄酮化合物（甘草素、甘草醇、甘草利酮、甘草查耳酮等）、糖类、生物碱类、香豆素类等，是一种补益中草药，具有抗炎、抗氧化、抗病毒和抗肿瘤等生理活性[17] ，将黄芪和甘草添加到基础饲料中可以明显增强对虾的免疫性能。该试验中黄芪组和甘草组对虾的AKP、ACP、POD和SOD均表现出较高的活力。板蓝根（Radix isatidis）的有效成分为靛苷、靛红、靛蓝、葡萄糖芸香素、棕榈酸和氨基酸等，具有清热解毒、凉血等功效，对流感病毒、乙型脑炎病毒和腮腺炎病毒有抑制其感染和增殖的作用[18-19]；柴胡（Bupleurum chinense）的有效成分为皂苷、甾醇、挥发油、有机酸、黄酮、多糖等，柴胡具有镇静、止痛、降温、镇咳、抗炎、抗菌、保肝利胆、降血压、抗病毒、抗肿瘤等生理活性[20]。添加在基础饲料中投喂35 d后的攻毒感染试验表明，试验对虾比对照组存活率提高56.41%和5520%。茯苓（Poria）含茯苓多糖、三萜类化合物茯苓素、茯苓聚糖分解酶、脂肪酶及蛋白酶等多种有益物质， 具有促进消化、吸收等功能[15，21]。该研究中茯苓组试验对虾肝胰腺消化酶（淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶）活性明显优于其他组。因此，不同中草药由于其有效成分不同，其发挥的功能也不同，就生长而言茯苓促生长作用较佳，黄芪、板蓝根、柴胡和甘草可以明显提高免疫力和抗病性能。张耀等[22]在饲料中添加中草药黄芪、黄岑（Radix scutellaria）、板兰根、茯苓、鱼腥草（Houttuynia cordata）等药用植物，发现可以通过改善动物肠道内环境，促进有益菌增殖，抑制有害菌的繁殖，从而提高营养物质的消化率；王芸等[23]用鱼腥草、黄芪、大黄（Rheum officinale）、甘草和黄芩的水提取物按质量分数为2%添加在饲料中连续饲养28 d，发现黄芪、大黄和甘草能够促进凡纳滨对虾的生长及非特异性免疫功能，注射鳗弧菌攻毒试验的结果表明黄芪、大黄和甘草的累計死亡率均低于对照组，免疫保护率为 37%～46%；汤菊芬等[24]在饲料中添加黄芪、当归（Angelica sinensis）、陈皮（Citrus reticulata Blanco）、金银花（Lonicera japonica）、板蓝根、连翘（Forsythia suspensa）等6种中草药，结果表明试验组凡纳滨对虾的增重率、成活率、饲料系数、蛋白质效率、抗病力等指标均优于对照组。该研究结果与江湧等[25]、周歧存等[26]和叶建生等[27]中草药制剂对凡纳滨对虾生长和消化酶活性的影响的研究结果相同。 随着对虾养殖规模的不断扩大、集约化程度的提高以及虾生存环境的恶化，疾病的危害程度越来越大，给养虾生产造成了巨大损失，而使用抗生素和其他化学类药物来防治养殖病害，容易引发一系列环境问题和社会问题。为此，利用中草药这一绿色、环保药物和添加剂提高虾体自身非特异性免疫能力和抗病能力，减少渔药使用，生产绿色对虾产品，促进对虾可持续健康发展。该试验结果表明黄芪、板蓝根、柴胡、甘草和茯苓可以明显提高凡纳滨对虾的生长和抗病力，其中茯苓促生长较佳，而黄芪、板蓝根、柴胡和甘草可以明显提高免疫力和抗病性能。
参考文献
[1]
[1]许雅香，许悻荣，鲁兴萌.對虾白斑综合症研究进展[J].中国兽医科技，2002，31（1）：12-14.
[2]王爱萍， 徐今宁. 中药免疫调节作用研究进展 [J].中国药业， 2011， 20（3）： 75-77.
[3]吕永辉，王玉堂.鱼药中的中草药[J].中国水产，2006（7）：91-94.
[4] KUMARAN T，MICHAELBABU M，SELVARAJ T， et al. Production of anti WSSV IgY edible antibody using herbal immuno-adjuvant Asparagus racemosus and its immunological influence against WSSV infection in Penaeus monodon[J]. J Aquac Feed Sci Nutr， 2010， 2（1）： 1-5.
[5] BALASUBRAMANIAN G， SARATHI M， VENKATESAN C， et al. Studies on the immunomodulatory effect of extract of Cyanodon dactylon in shrimp， Penaeus monodon， and its efficacy to protect the shrimp from white spot syndrome virus（WSSV）[J]. Fish shellfish immunol， 2008， 25（6）： 820-828.
[6] YOGEESWARAN A， VELMURUGAN S，PUNITHA S M， et al.Protection of Penaeus monodon against white spot syndrome virus by inactivated vaccine with herbal immunostimulants[J]. Fish shellfish immunol， 2012， 32（6）：1058-1067.
[7] BALASUBRAMANIAN G，SARATHI M，KUMAR S R，et al.Screening the antiviral activity of Indian medicinal plants against white spot syndrome virus in shrimp[J]. Aquaculture，2007， 263（1/2/3/4）： 15-19.
[8] BALASUBRAMANIAN G，SARATHI M，VENKATESAN C，et al. Oral administration of antiviral plant extract of Cynodon dactylon on a large scale production against white spot syndrome virus （WSSV） in Penaeus monodon[J]. Aquaculture，2008， 279（1/2/3/4）： 2-5.
[9] 郭志勋，李卓佳，管淑玉，等.抗对虾白斑综合症（WSSV）中草药的筛选及番石榴叶提取物对WSSV 致病性的影响[J].广东农业科学，2011，38（21）：129-131.
[10] 阴晓丽，李卓佳，管淑玉，等.番石榴叶水提取物抗对虾白斑综合征病毒有效成分初探[J].广东农业科学，2014，41（13）：87-93.
[11] 杨清华，郭志勋，林黑着，等.复方中草药添加浓度和投喂策略对凡纳滨对虾抗WSSV能力的影响[J].黑龙江畜牧兽医，2011（2） ：142-148.
[12] 吴俊文.南美白对虾白斑综合症防治技术探讨[J].吉林农业，2011（3）：259.
[13] 孔庆雷，齐志明，孔繁硅，等.619 种常用中药的元素分析（第一报）[J].中兽医医药杂志，1995（2）：8-10.
[14] 孔庆雷，齐志明，孔繁硅，等.619 种常用中药的元素分析（第二报）[J].中兽医医药杂志，1995（3）：4-7，16.
[15] 杜强，杨兴，吴林菁，等.中草药添加剂在水产养殖中的作用机制及应用前景[J]. 饲料研究，2014（11）：71-73.
[16] 张云龙，樊启学，姚昌林，等. 黄芩对水生动物生长及免疫功能影响的研究进展[J].养殖与饲料，2012（9）：96-98.
[17] 王世锋，徐萍，古丽米热·安外尔，等.甘草对铜胁迫下鲫鱼肝胰脏的抗氧化酶活性及血液红细胞中微核数量的影响[J].水产科学，2014，33（11）：713-717.
[18] 刘俊栋，刘海霞，李建基，等.中药板蓝根抗菌、抗病毒及对免疫系统作用的研究[J].中兽医医药杂志，2005（2）：22-23.
[19] 胡淑平，丁涛，张殿文，等.复方板蓝根含片的抗菌作用及对免疫功能的影响[J].中药药理与临床，2007，23（5）：188-190.
[20] 张锐，陈阿琴，俞颂东，等.柴胡抗炎及免疫药理学研究进展[J].中国兽医杂志，2006，40（3）：28-31.
[21] 刘红柏，张颖，杨雨辉，等. 5种中草药作为饲料添加剂对鲤肠内细菌及生长的影响[J].大连水产学院学报， 2004， 19（1）：16-20.
[22] 张耀，朱伟云.中草药对消化道微生物的影响[J]. 微生物学通报， 2007， 34（3）： 569-571.
[23] 王芸，李健，刘淇，等.5种中草药对凡纳滨对虾生长及非特异性免疫功能的影响[J]. 安徽农业科学， 2007， 35（26）： 8236-8239.
[24] 汤菊芬，陆志款，彭卫正，等.复方中草药对凡纳滨对虾生长、肌肉营养成分和抗病力的影响[J]. 饲料工业，2008，29（20）：23-26.
[25] 江湧，王广军，余德光.中草药添加剂对凡纳滨对虾生长和抗病力影响的研究[J].渔业现代化，2005（4）：35-37.
[26] 周歧存，罗从彦，韩兆红. 复合中草药对凡纳滨对虾生长及抗病力的影响[J]. 饲料研究， 2006（9）：53-56.
[27] 叶建生，马纷，王兴强，等.中草药制剂对凡纳滨对虾生长和消化酶活性的影响[J].中国海洋大学学报，2007，37（S1）：151-154.