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摘要：本文采用琅玡榆的腋芽为外植体进行愈伤组织诱导、不定芽分化、生根和移栽过程的研究，建立起了琅玡榆无性植株再生的快繁体系。
关键词：琅玡榆；组培；快繁
基金项目：南通市重大科技创新专项计划项目（HL2014003 ）
中图分类号： S788 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2017.15.016
琅玡榆，榆科榆属，落叶乔木，阳性树种，树皮淡褐灰色，裂成薄片脱落。小枝幼时密被柔毛，后变无毛，灰色或暗灰色，无木栓翅。冬芽卵圆形，芽鳞被毛[1]。叶互生，宽倒卵形、长圆状倒卵形或长圆状椭圆形，长6～18厘米，宽3～10厘米，先端短尾尖或尾状渐尖，基部偏斜，楔形至心形，边缘具重锯齿，上面密被短硬毛，粗糙，下面密被柔毛，侧脉15～21对。叶柄长1～1.5厘米，密被长柔毛。春季先叶开花，在生枝叶腋排成簇状聚伞花序。翅果窄倒卵形、长圆状倒卵形或宽倒卵形，长1.5～2.5厘米，宽1～1.7厘米，两面及边缘疏被或密被柔毛，果核位于翅果的中上部，上端接近缺口，果梗长12毫米，被短毛。稍耐荫、耐旱亦耐湿，耐盐碱，适合各类土壤生长[2]。本文对琅玡榆的组织培养快繁技术进行研究，以期缩短琅玡榆的育种周期，加快对该树种的研究进程，从而更多地为生产提供技术支持[3，4]。
1 材料与方法
1.1 外植体的采集及处理
3月中旬从室外采集琅玡榆的腋芽，在流水下冲洗30分钟，然后在超净工作台上用75%酒精消毒30秒，用无菌水冲洗1次，放入1%次氯酸钠溶液消毒10分钟，无菌水冲洗5次，待用。
1.2培养条件
培养温度在（25±2）℃的恒温条件下，光照条件一般是2000 lx，光照每日 12～16小时。
1.3 愈伤组织的诱导
在无菌条件下，将消毒的外植体分别接种不同生长调节剂的MS培养基上（见表1），诱导愈伤组织发生。每处理10瓶，每瓶5个叶片，重复3次。26天后，调查出愈率和愈伤组织长势。出愈率=（形成愈伤组织的叶片数/接种叶片数）×100%。
1. 4 愈伤组织分化培养
将培养 26天，生长良好的愈伤组织切成边长约为 0.5厘米的正方体小块，接种于不同的分化培养基（见表2），诱导愈伤组织产生不定芽。每处理 10 瓶，每瓶3个愈伤块，重复3次。45天 后调查平均出芽数和再生频率。愈伤组织上产生的不定芽生长到一定高度时，可直接接种于增殖培养基上进行继代培养。
平均出芽数=分化出的不定芽总数/接种愈伤块数
再生频率=（产生不定芽的愈伤块数/接种愈伤块数）×100%
1.5诱导生根培养
生根培养基采用1/2 MS基本培养基，附加不同浓度的6-BA 、IBA及NAA 诱导生根，具体处理见表3。每处理 10 瓶，每瓶 5 个嫩梢，重复 3 次。30天后调查统计生根率、平均生根条数、平均根长及平均茎高。
生根率=（不定根发生的茎段数/接种茎段数）×100%
平均生根条数=生根条数/接种茎段数
平均根长=根长总合/生根总条数
平均茎高=芽苗总高度/芽苗总数
1. 6 炼苗与移栽
当根系得到基本发育后，将培养瓶移到室外进行闭瓶炼苗7～10天左右，遮蔭度为50%～70%。然后在自然光下进行开瓶炼苗2～3 天。开瓶炼苗可以分阶段进行，即首先松盖1～2 天，然后部分开盖1～2天，最后完全揭盖。
2 结果与分析
2.1 不同生长调节剂对琅玡榆愈伤组织诱导的影响
从不同生长调节剂的培养基上诱导产生的愈伤组织结果（见表4）。9个处理中琅玡榆的腋芽都能产生愈伤组织。处理A1～A3中产生的愈伤组织白色柔软，培养15天后逐渐变为褐色，没有再生能力。当6-BA为3 mg/L时，愈伤组织多为绿色，长势良好，宜产生不定芽，且NAA为0.3mg/L 时出愈率最高为91.3%。当6-BA为4mg/L 时，愈伤组织长势下降且出愈率下降。
2.2不同生长调节剂对琅玡榆愈伤组织分化的影响
在 MS 培养基中添加不同浓度的 TDZ、NAA 对琅玡榆的愈伤进行培养，培养 45天后进行调查。由表 5可知， 在TDZ浓度为2 mg/L，死亡率在69%以上，再生频率只有7%以下，基本上不产生不定芽。在TDZ浓度为0.5mg/L，琅玡榆的愈伤分化死亡率有所上升在46%以下，再生频率在17%以上，但不定芽的量不多。当TDZ浓度为1.5mg/L，NAA浓度为0.4mg/L，分化的不定芽最多，死亡率达3.8%，再生频率为62.6%。
2.3不同生长调节剂对琅玡榆生根的影响
接种数天后逐渐从基部产生数条不定根，培养 30天后调查其生根状况。结果表明（见表6）：当IBA浓度在0.05mg/L，生根率最高在80%以上，其中与IAA 0.004mg/L和 NAA 4mg/L组合，生根效果最好，生根率在100%，平均根长达0.8厘米，平均生根数为8.5，平均茎高为3.2厘米。随着IBA浓度的加大，在0.1mg/L浓度时，生根率下降20%以下，生根效果也明显下降。
2.4 移栽
移栽之前应先闭瓶炼苗，再开瓶炼苗，使其逐步适应外界环境。移栽基质选用砂和蛭石质量比1：2。温度保持在 25℃左右。约25天后琅玡榆移栽苗的成活率在92%。
3 结论
琅玡榆最优化的组培成苗的生长调节剂配方是：愈伤组织其诱导配方是A6： MS+6-BA 3 mg/L+ NAA 0.3mg/L；愈伤组织分化配方是B5：MS+ TDZ 1.5mg/L+ NAA 0.4mg/L；生根配方是C4：1/2MS+6-BA 0.05 mg/L+ IBA 0.004 mg/L +NAA 4.0mg/L。
参考文献
[1]郑万钧主编.中国树木志：第 3 卷[M].北京：中国林业出版社，1997.54-55.
[2]傅立国.中国榆属的研究[J].东北林学院学报，1980（03）：1-40.
[3]朱大保.国外杨树组培微繁技术的进展[J].北京林业大学学报，1990，12（01）：84-91.
[4]陈正华.木本植物组织培养及其应用[M].北京：高等教育出版社，1986.
作者简介：马赞留，本科学历，工程师，研究方向：园艺研究。
关键词：琅玡榆；组培；快繁
基金项目：南通市重大科技创新专项计划项目（HL2014003 ）
中图分类号： S788 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2017.15.016
琅玡榆，榆科榆属，落叶乔木，阳性树种，树皮淡褐灰色，裂成薄片脱落。小枝幼时密被柔毛，后变无毛，灰色或暗灰色，无木栓翅。冬芽卵圆形，芽鳞被毛[1]。叶互生，宽倒卵形、长圆状倒卵形或长圆状椭圆形，长6～18厘米，宽3～10厘米，先端短尾尖或尾状渐尖，基部偏斜，楔形至心形，边缘具重锯齿，上面密被短硬毛，粗糙，下面密被柔毛，侧脉15～21对。叶柄长1～1.5厘米，密被长柔毛。春季先叶开花，在生枝叶腋排成簇状聚伞花序。翅果窄倒卵形、长圆状倒卵形或宽倒卵形，长1.5～2.5厘米，宽1～1.7厘米，两面及边缘疏被或密被柔毛，果核位于翅果的中上部，上端接近缺口，果梗长12毫米，被短毛。稍耐荫、耐旱亦耐湿，耐盐碱，适合各类土壤生长[2]。本文对琅玡榆的组织培养快繁技术进行研究，以期缩短琅玡榆的育种周期，加快对该树种的研究进程，从而更多地为生产提供技术支持[3，4]。
1 材料与方法
1.1 外植体的采集及处理
3月中旬从室外采集琅玡榆的腋芽，在流水下冲洗30分钟，然后在超净工作台上用75%酒精消毒30秒，用无菌水冲洗1次，放入1%次氯酸钠溶液消毒10分钟，无菌水冲洗5次，待用。
1.2培养条件
培养温度在（25±2）℃的恒温条件下，光照条件一般是2000 lx，光照每日 12～16小时。
1.3 愈伤组织的诱导
在无菌条件下，将消毒的外植体分别接种不同生长调节剂的MS培养基上（见表1），诱导愈伤组织发生。每处理10瓶，每瓶5个叶片，重复3次。26天后，调查出愈率和愈伤组织长势。出愈率=（形成愈伤组织的叶片数/接种叶片数）×100%。
1. 4 愈伤组织分化培养
将培养 26天，生长良好的愈伤组织切成边长约为 0.5厘米的正方体小块，接种于不同的分化培养基（见表2），诱导愈伤组织产生不定芽。每处理 10 瓶，每瓶3个愈伤块，重复3次。45天 后调查平均出芽数和再生频率。愈伤组织上产生的不定芽生长到一定高度时，可直接接种于增殖培养基上进行继代培养。
平均出芽数=分化出的不定芽总数/接种愈伤块数
再生频率=（产生不定芽的愈伤块数/接种愈伤块数）×100%
1.5诱导生根培养
生根培养基采用1/2 MS基本培养基，附加不同浓度的6-BA 、IBA及NAA 诱导生根，具体处理见表3。每处理 10 瓶，每瓶 5 个嫩梢，重复 3 次。30天后调查统计生根率、平均生根条数、平均根长及平均茎高。
生根率=（不定根发生的茎段数/接种茎段数）×100%
平均生根条数=生根条数/接种茎段数
平均根长=根长总合/生根总条数
平均茎高=芽苗总高度/芽苗总数
1. 6 炼苗与移栽
当根系得到基本发育后，将培养瓶移到室外进行闭瓶炼苗7～10天左右，遮蔭度为50%～70%。然后在自然光下进行开瓶炼苗2～3 天。开瓶炼苗可以分阶段进行，即首先松盖1～2 天，然后部分开盖1～2天，最后完全揭盖。
2 结果与分析
2.1 不同生长调节剂对琅玡榆愈伤组织诱导的影响
从不同生长调节剂的培养基上诱导产生的愈伤组织结果（见表4）。9个处理中琅玡榆的腋芽都能产生愈伤组织。处理A1～A3中产生的愈伤组织白色柔软，培养15天后逐渐变为褐色，没有再生能力。当6-BA为3 mg/L时，愈伤组织多为绿色，长势良好，宜产生不定芽，且NAA为0.3mg/L 时出愈率最高为91.3%。当6-BA为4mg/L 时，愈伤组织长势下降且出愈率下降。
2.2不同生长调节剂对琅玡榆愈伤组织分化的影响
在 MS 培养基中添加不同浓度的 TDZ、NAA 对琅玡榆的愈伤进行培养，培养 45天后进行调查。由表 5可知， 在TDZ浓度为2 mg/L，死亡率在69%以上，再生频率只有7%以下，基本上不产生不定芽。在TDZ浓度为0.5mg/L，琅玡榆的愈伤分化死亡率有所上升在46%以下，再生频率在17%以上，但不定芽的量不多。当TDZ浓度为1.5mg/L，NAA浓度为0.4mg/L，分化的不定芽最多，死亡率达3.8%，再生频率为62.6%。
2.3不同生长调节剂对琅玡榆生根的影响
接种数天后逐渐从基部产生数条不定根，培养 30天后调查其生根状况。结果表明（见表6）：当IBA浓度在0.05mg/L，生根率最高在80%以上，其中与IAA 0.004mg/L和 NAA 4mg/L组合，生根效果最好，生根率在100%，平均根长达0.8厘米，平均生根数为8.5，平均茎高为3.2厘米。随着IBA浓度的加大，在0.1mg/L浓度时，生根率下降20%以下，生根效果也明显下降。
2.4 移栽
移栽之前应先闭瓶炼苗，再开瓶炼苗，使其逐步适应外界环境。移栽基质选用砂和蛭石质量比1：2。温度保持在 25℃左右。约25天后琅玡榆移栽苗的成活率在92%。
3 结论
琅玡榆最优化的组培成苗的生长调节剂配方是：愈伤组织其诱导配方是A6： MS+6-BA 3 mg/L+ NAA 0.3mg/L；愈伤组织分化配方是B5：MS+ TDZ 1.5mg/L+ NAA 0.4mg/L；生根配方是C4：1/2MS+6-BA 0.05 mg/L+ IBA 0.004 mg/L +NAA 4.0mg/L。
参考文献
[1]郑万钧主编.中国树木志：第 3 卷[M].北京：中国林业出版社，1997.54-55.
[2]傅立国.中国榆属的研究[J].东北林学院学报，1980（03）：1-40.
[3]朱大保.国外杨树组培微繁技术的进展[J].北京林业大学学报，1990，12（01）：84-91.
[4]陈正华.木本植物组织培养及其应用[M].北京：高等教育出版社，1986.
作者简介：马赞留，本科学历，工程师，研究方向：园艺研究。