【摘 要】
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目的:将线粒体神经酰胺酶(mtCDase)转染到K562细胞,观察线粒体神经酰胺酶的细胞生物学效应.方法:以脂质体介导将含有mtCDase cDNA的pCDNA3.1/His-CDase质粒转染到K562细胞,G4
【机 构】
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河北医科大学第二医院血液科,河北医科大学基础医学院生物化学教研室
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目的:将线粒体神经酰胺酶(mtCDase)转染到K562细胞,观察线粒体神经酰胺酶的细胞生物学效应.方法:以脂质体介导将含有mtCDase cDNA的pCDNA3.1/His-CDase质粒转染到K562细胞,G418筛选阳性克隆,建立稳定表达mtCDase的K562TC细胞株.Annexin V/PI法、FCM及Western印迹法分别检测K562与K562TC细胞在无血清培养耐受性及Bcl-2蛋白表达水平方面的差异.结果:稳定表达mtCDase的K562TC细胞Bcl-2蛋白水平明显升高,抗血清剥夺能力明显增强.以硫代反义寡核苷酸特异性封闭K562TC细胞mtCDase,Bcl-2蛋白表达水平下调;二甲基鞘氨醇(DMS,鞘氨醇激酶抑制剂,降低细胞内1-磷酸鞘氨醇水平)同样下调K562TC细胞Bcl-2蛋白表达水平,而外源性1-磷酸鞘氨醇(SPP)显著上调K562细胞Bcl-2表达水平.结论:mtCDase转染K562细胞导致Bcl-2蛋白表达水平升高及无血清培养耐受能力增强.这种效应是通过mtCDase的下游代谢产物-SPP产生的.本研究证实mtCDase通过其下游代谢产物代谢SPP,上调K562细胞Bcl-2蛋白表达水平.
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