肾细胞癌MSCT灌注成像与分子病理学的相关性研究

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  【摘要】 目的 运用多层螺旋CT(MSCT)获取肾癌灌注图像,并与其分子病理学特征相对照,探讨MSCT灌注成像在肾癌诊断和鉴别诊断中的临床应用价值。方法 对42例疑有肾肿瘤的患者行 MSC灌注扫描,获得伪彩色的血流灌注参数图,包括血流量(BF)、血容量(BV)、表面通透性(PS)及平均通过时间(MTT)图。在瘤体及瘤旁正常肾皮质选取感兴趣区并记录相应的各项参数值。所有患者均经手术病理证实。采用免疫组化方法(SP法)检测肾肿瘤中血管内皮生长因子(VEGF)的表达及微血管密度(MVD)。结果 肾细胞癌的BF、BV和PS值均明显低于正常肾皮质,且Ⅲ 级肾癌与Ⅰ、Ⅱ级相比,其BF、BV和PS值明显增高。肾癌的BF、BV、PS值与其VEGF平均光密度值呈正相关(P<0.05),MTT值与VEGF平均光密度值呈负相关(P<0.05)。肾癌的MVD值与VEGF值呈正相关(P<0.05)。结论 MSCT灌注成像能定量评价肿瘤血管生成、血流灌注及血管通透性改变,有助于肾细胞癌的术前分级,并在肾癌的定性诊断和鉴别诊断方面有一定临床应用价值。
  【关键词】体层摄影术; X线计算机; 灌注成像; 肾肿瘤
  Correlative Study between Multi-slice CT Perfusion Imaging and Molecular Pathology in Renal Cell Carcinoma
  XIANG Cheng,FENG Chang-shen,XU Rui,et al.Rizhao People’s Hospital,Shandong,Rizhao 276800,China
  【Abstract】 Objective To study the correlation of the perfusion CT parameters and the molecular pathology characteristics of the renal cell carcinoma(RCC),and to discuss the value of multi-slice CT(MSCT)perfusion imaging in the diagnosis and differential diagnosis of RCC.Methods 42 patients with clinically suspected renal tumors underwent MSCT perfusion imaging.The maps of renal blood volume(BV),blood flow(BF),permeability surface(PS)and mean transit time(MTT)were obtained.Regions of interest(ROI)were drawn within the tumor and the region of normal area adjacent to the tumor.All of the tumors were proved by surgery and pathology withRCC(n=42).Vascular endothelial growth factor(VEGF)expression and micro-vascular density(MVD)were measured with immuno-histology chemistry technique(SP technique).Results Of the 42RCC,the mean BF,BV and PS value were obviously lower than that of normal renal cortex; moreover,the above-mentioned parameters in grade Ⅲweresignificantly higher than that of grade Ⅰand ⅡRCC.A significant inverse correlation(P<0.05)was observed between the mean MTT value and the VEGF expression.The mean BF,BV and PS of RCC had a significant positive correlation with VEGF expression(P<0.05).Conclusion Tumor angiogenesis,blood flow perfusion and permeability surface could be quantitatively evaluated by MSCT perfusion imaging.It provides useful information for pre-surgical staging of RCC and benefit s the clinical diagnosis and differential diagnosis of RCC.
  【Key words】Tomography,X-ray computed; Perfusion imaging; Renal neoplasms
  
  CT灌注成像因能定量判断活体组织,特别是肿瘤的血流动力学状况而成为近年来研究的热点,已初步应用于脑、心脏、肝、脾、胰等多种器官功能成像,并取得了可喜的进展[1]。随着多层螺旋CT的临床应用及灌注软件的改进,这方面的研究和应用正方兴未艾。目前关于肾肿瘤MSCT灌注成像国内鲜有报道,且多为动物实验,与临床的联系不够紧密。本研究应用MSCT灌注成像对肾癌的血流状况进行定量分析,并与其分子病理学特征相对照,旨在探讨MSCT灌注成像在肾癌定性诊断和鉴别诊断方面的临床应用价值。
  1 材料与方法
  2006年8月至2009年5月对我院42例经B超或CT平扫发现肾脏肿瘤的患者进行MSCT灌注成像,其中男33例,女9例,年龄43~67岁,平均52.3岁。肿瘤均为单侧发生,病灶直径2~8 cm,平均(3.8±2.4)cm。所有病例术前均未行化疗或放疗。MSCT灌注成像检查距手术时间为1~34 d,平均13.6 d。
  1.2 采用 GE Light speed TM 4×16层螺旋CT机,SUN图像后处理工作站,软件版本ADW 4.0,Perf usion 2灌注分析软件包。检查前训练患者呼吸,强调必须较长时间屏住呼吸。增强扫描前先行常规平扫以确定最佳的灌注扫描层面,采用体部肿瘤灌注扫描方案,扫描参数:电影模式,5 mm×4i,120 kV,60 mA,矩阵512×512,数据采集时间50 s,扫描延迟时间7 s,共获得396帧原始图像。使用高压注射器经患者肘前静脉注入非离子型对比剂(碘海醇或欧乃派克,300 mg I/ml),总量50 ml,注射流率3.5 ml/s。将原始扫描数据传输至工作站进行数据处理。采用体部肿瘤模式,确定阈值为-120~240 HU。输入动脉选择腹主动脉,输出静脉为下腔静脉或肠系膜上静脉。通过灌注软件获得CT灌注图像。观察全部灌注原始图像及增强后CT延迟图像,选择肿瘤实体部分最多的层面进行分析,肿瘤内兴趣区的选择尽量避开液化坏死区、钙化及伪影,并测量3个兴趣区取其平均值。灌注参数包括血流量(blood flow,BF)、血容量(blood volume,BV)、平均通过时间(meant ransittime,MTT)和表面通透性(permeability surface,PS)。同时测量癌旁正常肾皮质的各项灌注参数值。所有患者均行手术治疗。肿瘤标本均系常规外检取材,10%中性福尔马林溶液固定,石蜡包埋,1512石蜡切片机(德国Leitz 公司)3μm厚连续切片备用,其中取1张行HE染色确定病理诊断及分级。采用链菌素-生物素-过氧化酶连接法(streptavidin-biotin-peroxidase,SP法)进行免疫组化染色,测量肿瘤的微血管密度(microvascular density,MVD)。按照Weidner法[2]:双盲法阅片,先在低倍镜下选择血管密集区域,然后在100倍视野下,每张切片选择3个血管着色最密集区域计数微血管数量,内皮细胞及微小血管均计数,取均值作为该例肿瘤的MVD值。肾肿瘤中血管内皮生长因子(vascular endothelialgrouth factor,VEGF)免疫组化检测选用链菌素-生物素-过氧化酶连接法(SP法)进行。计数方法:在低倍镜(×40)视野下扫描整个组织切片,找到染色清晰、背景对照良好的热点(hot spot)区域,然后在高倍镜视野下选择3个视野存盘。采用 HPIAS22000 型彩色病理图文分析系统对VEGF 染色进行积分光密度分析,每个切片选取3个视野进行定量分析。
  1.3 统计学分析 采用SPSS11.5统计软件进行正态性检验、方差齐性检验,再根据情况进行t检验、方差检验或秩和检验。
  2 结果
  42例肾细胞癌中,Fuhrman分级Ⅰ级14例,Ⅱ级18例,Ⅲ级15例。11不同级别肾癌与正常肾皮质灌注参数的比较不同级别的肾细胞癌和肾皮质各项灌注参数的测量结果见表1。其中各级别肾细胞癌的BF值、BV值和PS值均明显低于正常肾皮质,差异有极显著性意义(P<0.01);Ⅱ级和Ⅲ级肾细胞癌的MTT值明显小于正常肾皮质,差异有极显著性意义(P<0.01)。Ⅲ级肾癌与Ⅰ、Ⅱ级肾癌相比,其BF值、BV值和PS值明显增高,差异均有极显著性意义(P<0.01)。
  肾癌的各项灌注参数与MVD值及VEGF表达水平的相关性对肾癌各灌注参数值与其 VEGF平均光密度值进行Pearson相关性分析,结果显示肾癌的BF、BV和PS值与肿瘤的 VEGF平均光密度值呈正相关(r值分别为0.79、0.76、0.72,P<0.01),MTT值与VEGF平均光密度值呈负相关(r=-0.673,P<0.01)。同时,肾癌的MVD值与平均光密度值呈正相关(r=0.67,P<0.01)。
  3 讨论
  灌注是指单位时间内单位体积组织的血流量,属于功能性研究范畴。Mile’s当年推导出实质脏器的CT灌注公式后,他首先将该方法成功应用在肾脏的灌注研究。随着近年来CT相关硬件及软件地飞速发展,尤其是多排螺旋CT地出现及图像后处理技术地不断提高,目前CT灌注研究技术已经有了非常大地改进和改善,已经建立相应的操作和计算体系,是一种比较成熟且相对容易操作的技术。CT灌注成像是指在静脉注射对比剂的同时对选定的层面进行连续多次的扫描,以获得该层面内每一象素的时间-密度曲线(time-density curve,TDC),根据该曲线利用不同的数学模型计算出BF、BV、MTT、PS等参数,以此来评价组织器官的灌注状态[3]。在肾脏疾病中,肿瘤是较为常见的疾病之一,其发病率和病死率均呈逐年增长的趋势。肾肿瘤多为恶性,在成人绝大多数为肾癌。不同性质的肿瘤或分化程度不同的恶性肿瘤,其血流动力学改变也不相同。肿瘤恶性程度越高,其分化程度越低,肿瘤新生血管也越多,且肿瘤血管内皮细胞越不完整,相邻的细胞间隙也越大,肿瘤细胞越容易进出血管造成远处转移[4,5]。肾脏是人体中血供(约1.0l/min)最丰富的器官之一[6],因此即使是血供丰富的肾细胞癌与癌旁正常肾皮质的血供相比也常常偏低。
  在本组病例中,不同级别的肾细胞癌,其灌注参数中BF、BV及PS明显低于正常肾皮质;同时,高级别与低级别的肾细胞癌相比,其灌注值升高。笔者推测随着肿瘤恶性程度的增加,在大量促血管生成因子的作用下,出现了大量肿瘤新生血管,从而引起了其血容量和灌注量的变化。Miles等[7]也认为血管的生成直接导致了肾癌组织的明显强化。由于肾癌新生血管的血管壁是不完整的,相邻血管内皮细胞间隙较大,因此肾癌内血管通透性明显增加,在高级别肾癌组织中更为明显,Gandhi等[8]也有类似报道。本组结果还发现在高级别(Ⅲ级)肾细胞癌中,MTT明显低于正常肾皮质,笔者推测系肿瘤内新生血管杂乱无章及存在大量动-静脉短路所致。肾癌起源于肾近曲小管上皮,肿瘤的中心多位于实质内,易向外生长导致肾轮廓的改变,其临床症状出现较晚。
  实体性肿瘤的某些生物学特性依赖于肿瘤内的血管生成,许多实验模型及临床病理研究均证实,实体肿瘤在无自身血供的情况下可以自行生长到(1~2)mm3,继续生长则需要新生血管。因此肿瘤血管生成是保证肿瘤持续生长所必需的,也是肿瘤侵袭和转移的重要条件,肿瘤微血管生成和血管生成因子的研究已成为当今肿瘤研究的热点之一。理论上血管生成促进因子的水平升高或抑制因子的水平下降,均可促使新生血管形成,但实际上肿瘤血管生成的调控机制十分复杂精密,目前尚没有完全阐明。在众多的血管生成相关因子中,VEGF被认为是最有效的血管生成促进因子。定量分析肿瘤血管生成的方法多采用MVD计数,即采用组织切片经过免疫组织化学方法检测肿瘤组织微血管并对其计数。已证明肿瘤的VEGF表达与MVD具有明显的相关性,两者都是反映肿瘤血管生成状态的指标。已有研究[9]发现,VEGF、MVD与肺癌、脑肿瘤灌注量(BF)有正相关性。本组结果显示肾癌的BF、BV 和PS与肿瘤的MVD值及VEGF平均光密度值呈明显正相关,MTT值与VEGF平均光密度值呈显著负相关。肿瘤的生长过程中,随着 VEGF 表达水平的上升,肿瘤新生血管明显增多,肿瘤MVD值增大,从而引起了肾癌BF、BV值的相应增加,同时肿瘤新生血管壁不完整、通透性增加,因此肿瘤PS值增加,而MTT值则明显缩短。由于肾癌的BF、BV及PS值与肾癌的MVD值和VEGF平均光密度值具有良好的相关性,因此笔者认为MSCT灌注成像能够非侵入性地在毛细血管水平定量检测肿瘤单位组织内的BF、BV、MTT及PS值,而这些参数则能准确地反映肾癌微血管的生成及肿瘤的血流状态。
  总之,MSCT灌注成像通过显示肾肿瘤组织血流灌注的病理生理改变,不仅能无创、准确地评价肿瘤新生血管血流灌注及通透性,而且能反映促血管生成因子如VEGF表达水平及活性,同时在肾癌的定性及鉴别诊断上具有一定的临床价值。
  参考文献
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