【摘 要】
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本研究目的是开发出一套简单有效的水疱性口炎病毒(VSV)的纯化方法,该方法可为基于VSV的医用治疗平台相应的载体,也可为疫苗及溶瘤剂的研发提供一定的技术支撑和物质储备。选用BHK细胞作为VSV复制的载体,并通过显微镜观察细胞病变(CPE)的出现;应用凝胶过滤层析法对收获且处理过的病毒液进行纯化,包括第1轮饱和硫酸铵沉淀高盐除杂和第2轮以严格的吸收峰洗脱为特色的凝胶过滤层析的进一步纯化。通过SDS-
【基金项目】
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吉林省科技发展计划资助项目(20190304038YY,20200404113YY);
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本研究目的是开发出一套简单有效的水疱性口炎病毒(VSV)的纯化方法,该方法可为基于VSV的医用治疗平台相应的载体,也可为疫苗及溶瘤剂的研发提供一定的技术支撑和物质储备。选用BHK细胞作为VSV复制的载体,并通过显微镜观察细胞病变(CPE)的出现;应用凝胶过滤层析法对收获且处理过的病毒液进行纯化,包括第1轮饱和硫酸铵沉淀高盐除杂和第2轮以严格的吸收峰洗脱为特色的凝胶过滤层析的进一步纯化。通过SDS-PAGE、Western blot、ELISA、电镜验证等分析纯化产物的纯度和准确性。SDS-PAGE显示本方法明显除去病毒上清中大部分杂质;Western blot、ELISA、电镜证实纯化产物是VSV病毒。经使用Reed-Muench法计算病毒的半数组织细胞感染量(TCID50)效价为10-2.72,RT-PCR的方法鉴定毒株为印第安纳毒株(Indiana, IN)。上述结果表明,本研究成功研制出一套方便、高效、简易的VSV纯化方法,为VSV的纯化和使用提供了参考依据。
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