【摘 要】
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目的 体外观察温阳活血利水方含药血清对膜攻击复合物C5b-9介导的非致死性足细胞损伤的影响,探讨该方药治疗特发性膜性肾病(IMN)的疗效机制.方法 体外组装C5b-9建立足细胞亚溶破模型,将足细胞分为正常对照组、模型组、他克莫司组、10％及20％含药血清组,并设他克莫司及中药血清空白对照组.激光共聚焦显微镜观测足细胞Klotho、瞬时受体电位通道(TRPC6)、组织蛋白酶L(CatL)及其底物Synaptopodin表达;采用荧光探针检测细胞内Ca2+水平;活性定量检测试剂盒测定RhoA及Rho关联含卷曲
【机 构】
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湖北中医药大学第一临床学院 武汉430061;湖北省中医院肾病科 武汉430061;湖北省中医药研究院肾病科 武汉430074;湖北中医药大学中医临床学院 武汉430061
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目的 体外观察温阳活血利水方含药血清对膜攻击复合物C5b-9介导的非致死性足细胞损伤的影响,探讨该方药治疗特发性膜性肾病(IMN)的疗效机制.方法 体外组装C5b-9建立足细胞亚溶破模型,将足细胞分为正常对照组、模型组、他克莫司组、10％及20％含药血清组,并设他克莫司及中药血清空白对照组.激光共聚焦显微镜观测足细胞Klotho、瞬时受体电位通道(TRPC6)、组织蛋白酶L(CatL)及其底物Synaptopodin表达;采用荧光探针检测细胞内Ca2+水平;活性定量检测试剂盒测定RhoA及Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)活性;Western Blot检测LIM结构域激酶1(LIMK1)、cofilin蛋白及其磷酸化蛋白表达.结果 与正常对照组比较,模型组足细胞Klotho及Synaptopodin表达下调(P＜0.01);TRPC6、CatL、Ca2+、RhoA、ROCK、p-LIMK1/LIMK1及 p-cofilin/cofilin 表达上调(P＜0.01);骨架微丝明显减少,排列紊乱.与模型组比较,各干预组足细胞Klotho与Synaptopodin的表达上调(P＜0.01);而 TRPC6、CatL、Ca2+、RhoA、ROCK、p-LIMK1/LIMK1及 p-cofilin/cofilin 表达下调(P＜0.01);中药血清和他克莫司均改善了足细胞骨架的重构.结论 温阳活血利水方含药血清可能通过调控Klotho/TRPC6/CatL通路,从而稳定非致死性C5b-9介导的细胞骨架紊乱.
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