【摘 要】
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目的 拯救携带OX40L的重组溶瘤流感病毒株，全面鉴定并评价其靶向杀伤肝癌细胞的效果。方法 将编码OX40L的基因片段嵌合在A/Puerto Rico/8/34 （PR8）的NS片段特定位置，利用反向遗传学技术（reverse genetics,RG），与PR8流感病毒的剩余7个骨架质粒pHW191-PB2、 pHW192-PB1、 pHW193-PA、 pHW194-HA、 pHW195-NP、
【基金项目】
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北京市自然科学基金（7202194）资助项目～～；
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目的 拯救携带OX40L的重组溶瘤流感病毒株，全面鉴定并评价其靶向杀伤肝癌细胞的效果。方法 将编码OX40L的基因片段嵌合在A/Puerto Rico/8/34 （PR8）的NS片段特定位置，利用反向遗传学技术（reverse genetics,RG），与PR8流感病毒的剩余7个骨架质粒pHW191-PB2、 pHW192-PB1、 pHW193-PA、 pHW194-HA、 pHW195-NP、 p HW196-NA、p HW197-M共转染COSⅠ/MDCK细胞，成功拯救获得重组溶瘤流感病毒，命名为r Flu-OX40L。经血凝、TCID50方法测定病毒滴度；重组病毒纯化后电镜观察病毒形态特征及大小分布；检测MDCK细胞病毒生长曲线；MTS法检测重组病毒对肝癌细胞活力的影响；流式细胞术检测重组病毒诱导肝癌细胞死亡方式；利用肝癌荷瘤小鼠模型评价重组病毒r Flu-OX40L在动物体内的抗肿瘤效果。结果 重组溶瘤流感病毒rFlu-OX40L可在鸡胚中稳定传代，HA效价达27～8，病毒滴度可达7～8 Lg TCID50/ml；重组病毒rFlu-OX40L与流感病毒PR8生长曲线相一致，72 h达高峰；MTS结果显示，3 MOI重组病毒可显著降低肝癌细胞活力，且对正常肝细胞无明显影响，呈时间和剂量依赖性；流式细胞结果显示，重组病毒可显著诱导肝癌细胞凋亡，呈时间和剂量依赖性；利用肝癌荷瘤小鼠模型，瘤内注射重组溶瘤流感病毒rFlu-OX40L较PR8、PBS对照组，小鼠脾细胞中CD3+、CD4+、CD8+、CD45+、CD69+T细胞数量呈现显著升高趋势。结论 携带OX40L的重组溶瘤流感病毒rFlu-OX40L在体内外均可选择性杀伤肝癌细胞，有望为肝癌的临床治疗提供新的免疫治疗策略。
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