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摘要：为探讨中药理囊散对产后奶牛生殖激素的影响，使20头荷斯坦奶牛于产后0、15 d口服中药理囊散，统计受胎率，通过酶联免疫法（ELISA）分析理囊散对产后奶牛血清中促黃体素（LH）、促卵泡素（FSH）、孕酮（P4）、雌二醇（E2）含量的影响。结果显示，试验组（A组）45 d内的受胎率为70%，显著高于对照组（B组）。血清中FSH含量于产后15、30 d达到最大值，LH含量于产后20 d达到最大值，E2含量于产后20、30 d达到最大值，均极显著高于对照组同时期FSH、LH、E2的含量（P<0.01）。P4含量从产后15 d开始上升，于产后20 d达到最大值，极显著高于对照组（P<001），并于产后30 d下降，极显著低于对照组（P>0.05）。理囊散能刺激卵巢活动，提高产后奶牛血清中FSH、LH、P4、E2分泌水平，提升早期受胎率，缩短产犊间隔，对产后奶牛子宫机能的恢复具有显著作用。
关键词：理囊散；子宫复旧；奶牛；生殖激素
中图分类号： S858.237.2 3 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2015）07-0203-03
奶牛子宫复旧是指产后子宫恢复到未孕时形态和功能的生理过程[1]，子宫复旧的过程和状态决定着奶牛产后首次发情的受胎率，若产后发情时间推迟，产犊间隔就会延长。我国仅有小部分中、小型奶牛场的产犊间隔天数可达365～380 d，90%的母牛产犊间隔在400 d以上，有的甚至达到455 d，有半数产后母牛的空怀时间在90～120 d，严重影响奶牛场的经济效益，制约着我国奶牛业的健康发展[2，5]。为缩短奶牛的产犊间隔，不仅要对产后母牛进行科学的饲养管理，还应进行产后早期的相应处理。中药具有疗效确切、无残留、毒副作用小等优点，因此开发利用中草药促进产后奶牛子宫恢复具有重要意义。本试验通过理囊散对产后奶牛的处理，加快子宫恢复时间，提高早期受胎率，缩短产犊间隔，检测理囊散对产后奶牛子宫复旧期间生殖激素的影响，为中兽药治疗产后疾病提供一定理论基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验动物 于2013年4—11月在新疆志翔牧业奶牛场、西部牧业奶牛场进行临床试验。在排除传染病、寄生虫病、肉眼可见的生殖道疾病、先天性因素的基础上，选择产犊胎次不同的荷斯坦奶牛40头并分为2组，每组各20头。A组为试验组，即灌服理囊散治疗组；B组为对照组，即自然恢复健康组。
1.1.2 仪器与设备 PowerWave XS2 BioTek型酶标仪；-80 ℃ 超低温冰箱；Eppendorf Research型移液器（艾本德中国有限公司）。
1.1.3 主要药品与试剂 LH、FSH、E2、P4 ELISA试剂盒购于上海蓝基生物科技有限公司，其中LH、FSH、P4的灵敏度为0.1 ng/mL，E2的灵敏度为1 pg/mL。理囊散由女贞子、熟地黄、附子、三棱、藿香、香附子、甘草、青皮等12味中药组成。
1.2 方法
1.2.1 投药及采血时间 试验组每头奶牛于分娩完成4 h后灌服理囊散400 g，每天1次，连续1个疗程（5 d），观察 10 d 后继续灌服1个疗程。灌服理囊散前第1次采血，第1个疗程结束后第2次采血，每隔5 d采血1次，共采血10次，采血时间为09：00—10：00。奶牛空腹时于尾静脉采取血液10 mL，并于室温下静置，血清自然析出后分装于1.5 mL离心管中，置于-80 ℃冰箱保存待检。对照组每次灌服无菌生理盐水400 g，灌服天数、采血时间均与试验组相同。
1.2.2 激素含量的测定 上述所采集血清中的LH、FSH、E2、P4含量均采用酶联免疫法测定，按试剂盒使用说明书操作。
1.2.3 疗效判定 经直肠检查，子宫基本恢复正常大小且没有恶露排出，可判定为有效。经直肠检查，子宫庞大或子宫壁肿胀，仍有恶露或脓性分泌物排出，子宫复原差且弛缓，含有大量液体，按摩子宫体、子宫颈、阴道前部会促使恶臭分泌物流出阴门，则判定为无效。用药疗程结束后，产后0～45 d内未发情则判定为无效；产后0～60 d进行人工授精，未受孕者则判定为无效。
1.2.4 统计分析 采用SPSS 17.0软件对数据进行单因素方差分析。试验数据均以平均数±标准差表示。
2 结果与分析
2.1 理囊散对产后奶牛子宫复旧的治疗效果
A组奶牛30、45 d内的发情率高于B组奶牛，且45 d内的受胎率、有效比均高于B组奶牛（表1）。经产奶牛的产后恢复时间短于第1、2胎奶牛。
2.2 理囊散对产后奶牛血清中生殖激素的影响
根据表2、表3中数据绘制各激素的变化曲线（图1至图4）。A组中经理囊散2个疗程处理的产后奶牛，在产后15、30 d，血清中FSH、E2含量均出现2个高峰期，极显著高于B组同时期FSH、E2的含量（P<0.01），B组奶牛血清中FSH含量在产后20、30 d出现2个高峰期，而E2含量在子宫复旧期间仅出现1个高峰期。A组奶牛血清中LH含量在产后 10 d 开始上升，并于产后20 d达到最大值，极显著高于B组同时期LH的含量（P<0.01）。A组奶牛血清中P4含量在产后15 d开始升高，并于产后20 d达到最大值，产后35 d后持续高含量水平，极显著高于B组同时期P4的含量（P<001）。可见，A组奶牛血清中FSH、LH、P4、E2的含量比B组提前5 d达到最大值，总体变化规律基本与魏学良[6]、高树等[7]的研究结论相符。
3 讨论
3.1 理囊散对产后奶牛血清中FSH、LH水平的影响
试验结果表明，A、B组奶牛子宫复旧期间血清中FSH、LH均处于较低水平。魏学良、高树等研究发现，奶牛产后2周内血清中LH浓度水平较低，于3周后上升，呈剧烈的活动变化，而FSH在产后12 d内均处于较低水平[6-7]，本试验结论与之基本一致。可能的原因为产后2周内促性腺激素释放激素（GnRH）的释放脉冲频率尚未恢复，致使FSH、LH的水平较低，并由于FSH、LH对GnRH的分泌反应不同所致。低频率的GnRH可引起FSH的释放，而仅当GnRH脉冲频率高达1次/h才可释放LH[8]。经理囊散处理后，A组奶牛产后15、30 d发情头数明显多于B组，直肠检查发现卵巢上卵泡活动频繁，检测结果显示血清中FSH含量在产后15、30 d达到最大值。血清中LH的含量在产后15 d开始逐渐上升，并于产后20 d达到最大值，表明卵巢上的卵泡退化后形成正常黄体。现代中兽医理论认为，理囊散可使产后奶牛卵巢提前活动，并提高奶牛机体内FSH、LH的分泌水平，是由于母畜的性周期变化受下丘脑-垂体-卵巢轴的调节[9]。据报道，补肾中药可降低促乳素分泌水平[10-11]，而理囊散中的熟地黄、女贞子、附子、甘草均属于补肾、益精、填髓的药物，可使产后奶牛的促乳素水平下降，解除高水平促乳素对下丘脑-垂体-卵巢轴的抑制作用，从而刺激卵巢活动。 3.2 理囊散对产后奶牛血清中P4、E2水平的影响
P4在产后15 d内处于较低水平，从产后20 d开始逐渐上升，于产后25 d达到最大值，并于产后30 d达到最小值，产后35 d后趋于平稳上升（图3）。P4由黄体与胎盘产生，P4含量随分娩后妊娠黄体的退化而急剧下降，产后0 d左右降到基础水平，并维持在较低水平直至产后第1次排卵，从产后15 d开始明显上升，并于产后25 d达到峰值，其原因是第1次排卵结束后形成黄体并出现短暂的周期，产后35 d后A组明显趋于平稳上升，经直肠检查部分奶牛已受孕，卵巢上形成妊娠黄体，分泌P4水平增加，促使整体水平提高。经理囊散处理后，A组奶牛血清中E2含量不仅显著高于同时期B组，且分泌时间提前5 d（图4）。据报道，切除卵巢的动物，其子宫对催产素的敏感性很低，而经E2处理的子宫敏感性则很高，微量催产素即可引起子宫肌的有力收缩，从而加强子宫的早期恢复[12]。E2可增强子宫的收缩能力，有促进子宫复旧的作用，E2还可刺激子宫黏膜产生大量催产素受体，利于催产素对子宫的收缩作用，加快产后奶牛子宫内恶露的排放，减少子宫炎症等疾病的發生，为人工授精提供良好的子宫环境。影响产后奶牛子宫机能恢复的因素较为复杂，其中卵巢是影响E2分泌水平最主要的因素之一。母畜性周期变化受下丘脑-垂体-卵巢轴的调节，E2是此调节系统中的关键激素[13]，而理囊散中的熟地黄可上调雌性小鼠老化进程中E2的含量[14]，且理囊散中的醇溶性成分可促进小鼠子宫发育，具有明显的促孕活性[15]。
4 结论
理囊散具有添加小剂量外源E2的作用，通过下丘脑-垂体-卵巢轴的调节促进和提高产后奶牛血清中FSH、LH、P4、E2的分泌水平，进而加快产后奶牛恶露的排放、发情时间及子宫形态的恢复，从而提高受胎率，缩短产犊间隔期。理囊散具有奶牛产后保健作用，可加快产后奶牛生殖机能的恢复。
参考文献：
[1]Ghanem M，Shalaby A H，Sharawy S，et al. Factors leading to endometritis in dairy cows in Egypt with special reference to re-productive performance[J]. The Journal of Reproduction and Development，2002，48（4）：371-375.
[2]吕新峰. 采取综合措施缩短奶牛产犊间隔的研究[D]. 石河子：石河子大学，2008.
[3]何剑斌，从 霞，刘明春，等. 奶牛子宫复旧的扫描电镜观察[J]. 中国兽医杂志，2004，40（5）：15-17.
[4]田文儒，何剑斌，丛 霞，等. 产后奶牛子宫内膜的扫描电镜观察[J]. 中国兽医学报，2004，24（2）：183-186.
[5]李守军，田文儒，范友胜，等. 奶牛子宫复旧的B-超影像学研究[J]. 黑龙江畜牧兽医，2001，10（1）：49.
[6]魏学良. 奶牛产后生殖机能恢复规律研究[D]. 重庆：西南农业大学，2001.
[7]高 树，赛务加甫. 奶牛子宫复旧期间FSH和LH动态变化规律研究[J]. 中国奶牛，2012（8）：30-32.
[8]Akbar H，Schams D. Prohctin release in cattle[J]. Reprod and Fert，2007，39：463-467.
[9]邵会娟，李炳奇，唐利容，等. 中药复方“促孕散”中生物碱的提取方法及其促孕活性研究[J]. 石河子大学学报：自然科学版，2010，28（2）：184-188.
[10]杜惠兰，段彦苍，宋翠淼. 补肾调经方对雄激素诱导无排卵大鼠血清生殖激素及子宫、卵巢性激素受体水平的影响[J]. 北京中医药大学学报，2004，27（4）：23-27.
[11]段彦苍. 补肾中药对无排卵大鼠模型生殖激素及其受体的影响[D]. 石家庄：河北医科大学，2002.
[12]Akbar A M，Reichert L E，Dunn T G，et al. Serum levels of follicle-stimulating hormone during the bovine estrous cycle[J]. Journal of Animal Science，1974，39（2）：360-365.
[13]胡元亮，王小龙. 中药促孕液对小白鼠生殖器官发育和结构的影响[J]. 畜牧兽医学报，2001，32（5）：426-433.
[14]高治平. 熟地黄对雌性小鼠老化进程中雌、孕激素受体含量的上调作用[J]. 山西中医学院学报，2000，1（4）：1-3.
[15]曾云军，刘 红，谷新利，等. “理囊散”中醇溶性成分的提取及促孕活性研究[J]. 江苏农业科学，2012，40（12）：224-226.
关键词：理囊散；子宫复旧；奶牛；生殖激素
中图分类号： S858.237.2 3 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2015）07-0203-03
奶牛子宫复旧是指产后子宫恢复到未孕时形态和功能的生理过程[1]，子宫复旧的过程和状态决定着奶牛产后首次发情的受胎率，若产后发情时间推迟，产犊间隔就会延长。我国仅有小部分中、小型奶牛场的产犊间隔天数可达365～380 d，90%的母牛产犊间隔在400 d以上，有的甚至达到455 d，有半数产后母牛的空怀时间在90～120 d，严重影响奶牛场的经济效益，制约着我国奶牛业的健康发展[2，5]。为缩短奶牛的产犊间隔，不仅要对产后母牛进行科学的饲养管理，还应进行产后早期的相应处理。中药具有疗效确切、无残留、毒副作用小等优点，因此开发利用中草药促进产后奶牛子宫恢复具有重要意义。本试验通过理囊散对产后奶牛的处理，加快子宫恢复时间，提高早期受胎率，缩短产犊间隔，检测理囊散对产后奶牛子宫复旧期间生殖激素的影响，为中兽药治疗产后疾病提供一定理论基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验动物 于2013年4—11月在新疆志翔牧业奶牛场、西部牧业奶牛场进行临床试验。在排除传染病、寄生虫病、肉眼可见的生殖道疾病、先天性因素的基础上，选择产犊胎次不同的荷斯坦奶牛40头并分为2组，每组各20头。A组为试验组，即灌服理囊散治疗组；B组为对照组，即自然恢复健康组。
1.1.2 仪器与设备 PowerWave XS2 BioTek型酶标仪；-80 ℃ 超低温冰箱；Eppendorf Research型移液器（艾本德中国有限公司）。
1.1.3 主要药品与试剂 LH、FSH、E2、P4 ELISA试剂盒购于上海蓝基生物科技有限公司，其中LH、FSH、P4的灵敏度为0.1 ng/mL，E2的灵敏度为1 pg/mL。理囊散由女贞子、熟地黄、附子、三棱、藿香、香附子、甘草、青皮等12味中药组成。
1.2 方法
1.2.1 投药及采血时间 试验组每头奶牛于分娩完成4 h后灌服理囊散400 g，每天1次，连续1个疗程（5 d），观察 10 d 后继续灌服1个疗程。灌服理囊散前第1次采血，第1个疗程结束后第2次采血，每隔5 d采血1次，共采血10次，采血时间为09：00—10：00。奶牛空腹时于尾静脉采取血液10 mL，并于室温下静置，血清自然析出后分装于1.5 mL离心管中，置于-80 ℃冰箱保存待检。对照组每次灌服无菌生理盐水400 g，灌服天数、采血时间均与试验组相同。
1.2.2 激素含量的测定 上述所采集血清中的LH、FSH、E2、P4含量均采用酶联免疫法测定，按试剂盒使用说明书操作。
1.2.3 疗效判定 经直肠检查，子宫基本恢复正常大小且没有恶露排出，可判定为有效。经直肠检查，子宫庞大或子宫壁肿胀，仍有恶露或脓性分泌物排出，子宫复原差且弛缓，含有大量液体，按摩子宫体、子宫颈、阴道前部会促使恶臭分泌物流出阴门，则判定为无效。用药疗程结束后，产后0～45 d内未发情则判定为无效；产后0～60 d进行人工授精，未受孕者则判定为无效。
1.2.4 统计分析 采用SPSS 17.0软件对数据进行单因素方差分析。试验数据均以平均数±标准差表示。
2 结果与分析
2.1 理囊散对产后奶牛子宫复旧的治疗效果
A组奶牛30、45 d内的发情率高于B组奶牛，且45 d内的受胎率、有效比均高于B组奶牛（表1）。经产奶牛的产后恢复时间短于第1、2胎奶牛。
2.2 理囊散对产后奶牛血清中生殖激素的影响
根据表2、表3中数据绘制各激素的变化曲线（图1至图4）。A组中经理囊散2个疗程处理的产后奶牛，在产后15、30 d，血清中FSH、E2含量均出现2个高峰期，极显著高于B组同时期FSH、E2的含量（P<0.01），B组奶牛血清中FSH含量在产后20、30 d出现2个高峰期，而E2含量在子宫复旧期间仅出现1个高峰期。A组奶牛血清中LH含量在产后 10 d 开始上升，并于产后20 d达到最大值，极显著高于B组同时期LH的含量（P<0.01）。A组奶牛血清中P4含量在产后15 d开始升高，并于产后20 d达到最大值，产后35 d后持续高含量水平，极显著高于B组同时期P4的含量（P<001）。可见，A组奶牛血清中FSH、LH、P4、E2的含量比B组提前5 d达到最大值，总体变化规律基本与魏学良[6]、高树等[7]的研究结论相符。
3 讨论
3.1 理囊散对产后奶牛血清中FSH、LH水平的影响
试验结果表明，A、B组奶牛子宫复旧期间血清中FSH、LH均处于较低水平。魏学良、高树等研究发现，奶牛产后2周内血清中LH浓度水平较低，于3周后上升，呈剧烈的活动变化，而FSH在产后12 d内均处于较低水平[6-7]，本试验结论与之基本一致。可能的原因为产后2周内促性腺激素释放激素（GnRH）的释放脉冲频率尚未恢复，致使FSH、LH的水平较低，并由于FSH、LH对GnRH的分泌反应不同所致。低频率的GnRH可引起FSH的释放，而仅当GnRH脉冲频率高达1次/h才可释放LH[8]。经理囊散处理后，A组奶牛产后15、30 d发情头数明显多于B组，直肠检查发现卵巢上卵泡活动频繁，检测结果显示血清中FSH含量在产后15、30 d达到最大值。血清中LH的含量在产后15 d开始逐渐上升，并于产后20 d达到最大值，表明卵巢上的卵泡退化后形成正常黄体。现代中兽医理论认为，理囊散可使产后奶牛卵巢提前活动，并提高奶牛机体内FSH、LH的分泌水平，是由于母畜的性周期变化受下丘脑-垂体-卵巢轴的调节[9]。据报道，补肾中药可降低促乳素分泌水平[10-11]，而理囊散中的熟地黄、女贞子、附子、甘草均属于补肾、益精、填髓的药物，可使产后奶牛的促乳素水平下降，解除高水平促乳素对下丘脑-垂体-卵巢轴的抑制作用，从而刺激卵巢活动。 3.2 理囊散对产后奶牛血清中P4、E2水平的影响
P4在产后15 d内处于较低水平，从产后20 d开始逐渐上升，于产后25 d达到最大值，并于产后30 d达到最小值，产后35 d后趋于平稳上升（图3）。P4由黄体与胎盘产生，P4含量随分娩后妊娠黄体的退化而急剧下降，产后0 d左右降到基础水平，并维持在较低水平直至产后第1次排卵，从产后15 d开始明显上升，并于产后25 d达到峰值，其原因是第1次排卵结束后形成黄体并出现短暂的周期，产后35 d后A组明显趋于平稳上升，经直肠检查部分奶牛已受孕，卵巢上形成妊娠黄体，分泌P4水平增加，促使整体水平提高。经理囊散处理后，A组奶牛血清中E2含量不仅显著高于同时期B组，且分泌时间提前5 d（图4）。据报道，切除卵巢的动物，其子宫对催产素的敏感性很低，而经E2处理的子宫敏感性则很高，微量催产素即可引起子宫肌的有力收缩，从而加强子宫的早期恢复[12]。E2可增强子宫的收缩能力，有促进子宫复旧的作用，E2还可刺激子宫黏膜产生大量催产素受体，利于催产素对子宫的收缩作用，加快产后奶牛子宫内恶露的排放，减少子宫炎症等疾病的發生，为人工授精提供良好的子宫环境。影响产后奶牛子宫机能恢复的因素较为复杂，其中卵巢是影响E2分泌水平最主要的因素之一。母畜性周期变化受下丘脑-垂体-卵巢轴的调节，E2是此调节系统中的关键激素[13]，而理囊散中的熟地黄可上调雌性小鼠老化进程中E2的含量[14]，且理囊散中的醇溶性成分可促进小鼠子宫发育，具有明显的促孕活性[15]。
4 结论
理囊散具有添加小剂量外源E2的作用，通过下丘脑-垂体-卵巢轴的调节促进和提高产后奶牛血清中FSH、LH、P4、E2的分泌水平，进而加快产后奶牛恶露的排放、发情时间及子宫形态的恢复，从而提高受胎率，缩短产犊间隔期。理囊散具有奶牛产后保健作用，可加快产后奶牛生殖机能的恢复。
参考文献：
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[2]吕新峰. 采取综合措施缩短奶牛产犊间隔的研究[D]. 石河子：石河子大学，2008.
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[8]Akbar H，Schams D. Prohctin release in cattle[J]. Reprod and Fert，2007，39：463-467.
[9]邵会娟，李炳奇，唐利容，等. 中药复方“促孕散”中生物碱的提取方法及其促孕活性研究[J]. 石河子大学学报：自然科学版，2010，28（2）：184-188.
[10]杜惠兰，段彦苍，宋翠淼. 补肾调经方对雄激素诱导无排卵大鼠血清生殖激素及子宫、卵巢性激素受体水平的影响[J]. 北京中医药大学学报，2004，27（4）：23-27.
[11]段彦苍. 补肾中药对无排卵大鼠模型生殖激素及其受体的影响[D]. 石家庄：河北医科大学，2002.
[12]Akbar A M，Reichert L E，Dunn T G，et al. Serum levels of follicle-stimulating hormone during the bovine estrous cycle[J]. Journal of Animal Science，1974，39（2）：360-365.
[13]胡元亮，王小龙. 中药促孕液对小白鼠生殖器官发育和结构的影响[J]. 畜牧兽医学报，2001，32（5）：426-433.
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[15]曾云军，刘 红，谷新利，等. “理囊散”中醇溶性成分的提取及促孕活性研究[J]. 江苏农业科学，2012，40（12）：224-226.