【摘 要】
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为获取DnaJ蛋白多克隆抗体,将截短的环形泰勒虫DnaJ蛋白C末端核酸序列构建在pET-30a(+)质粒并转化至Rosetta(DE3)感受态细胞,经终浓度1 mmol/L IPTG 37℃C诱导表达,蛋白可溶性分析结果显示,该重组蛋白主要以包涵体的形式存在.SDS-PAGE结果显示,纯化后的蛋白分为2条,其中一条蛋白大小约为41.65ku,与预期结果相符,另外一条蛋白可能因为翻译提前终止比预期条带位置偏低.将纯化后的重组蛋白与弗氏佐剂混匀乳化后,皮下分点注射BALB/c小鼠,制备小鼠源DnaJ蛋白多克隆
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室,甘肃兰州 730046;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验
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为获取DnaJ蛋白多克隆抗体,将截短的环形泰勒虫DnaJ蛋白C末端核酸序列构建在pET-30a(+)质粒并转化至Rosetta(DE3)感受态细胞,经终浓度1 mmol/L IPTG 37℃C诱导表达,蛋白可溶性分析结果显示,该重组蛋白主要以包涵体的形式存在.SDS-PAGE结果显示,纯化后的蛋白分为2条,其中一条蛋白大小约为41.65ku,与预期结果相符,另外一条蛋白可能因为翻译提前终止比预期条带位置偏低.将纯化后的重组蛋白与弗氏佐剂混匀乳化后,皮下分点注射BALB/c小鼠,制备小鼠源DnaJ蛋白多克隆抗体.通过Western-blot验证,发现截短后的环形泰勒虫DnaJ蛋白与抗His单克隆抗体、环形泰勒虫阳性血清和抗DnaJ多克隆抗体均能反应,表明该蛋白产物具有良好的反应原性.获得的多克隆抗体可用于研究环形泰勒虫DnaJ蛋白的功能.
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