探讨氟暴露对于人成骨细胞系Saos-2细胞(简称Saos-2细胞)微小RNA(miR)-200c表达及其靶点的影响。
方法采用DMEM/F-12培养液,体外培养Saos-2细胞。按培养液中氟化钠(NaF)剂量将Saos-2细胞分为对照组(0 mg/L)、染氟组(4 mg/L),染氟培养48 h后收集细胞。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Saos-2细胞中miR-200c表达,碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)及miR-200c作用靶点人第10号染色体缺失磷酸酶(PTEN)、双特异性磷酸酶(DUSP1)mRNA的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PTEN、DUSP1蛋白表达。
结果染氟组Saos-2细胞中ALP、BGP mRNA和miR-200c表达(23.60 ± 1.87、9.41 ± 0.94、8.61 ± 0.26)高于对照组(1.00 ± 0.11、1.00 ± 0.07、1.00 ± 0.12),组间比较差异有统计学意义(t=- 24.084、- 18.388、- 8.687,P均< 0.05);PTEN和DUSP1 mRNA表达(0.63 ± 0.02、0.38 ± 0.02)低于对照组(1.02 ± 0.24、1.02 ± 0.24),组间比较差异有统计学意义(t=3.327、5.454,P均< 0.05)。染氟组Saos-2细胞PTEN、DUSP1蛋白表达(1.19 ± 0.10、0.83 ± 0.07)低于对照组(1.81 ± 0.14、1.44 ± 0.25),组间比较差异有统计学意义(t=6.250、4.171,P均< 0.05)。
结论氟暴露能够使Saos-2细胞miR-200c表达水平升高,通过miR-200c作用于PTEN和DUSP1,下调PTEN、DUSP1 mRNA与蛋白表达水平。