CDK1磷酸化修饰对驱动蛋白Kif18A的ATP酶活性的影响

来源 :天津师范大学学报:自然科学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户：zm_627

【摘要】

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为了探究真核细胞中蛋白激酶CDK1的磷酸化修饰对驱动蛋白分子Kif18A的ATP酶活性的影响,利用昆虫杆状病毒表达系统,在体外表达并纯化Kif18A模拟磷酸化(EE)和非磷酸化(AA)的突

【作者】

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苏春玉周之春朱长军

【机构】

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天津师范大学生命科学学院,天津师范大学天津市动植物抗性重点实验室,天津师范大学分子细胞系统生物学重点实验室

【出处】

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天津师范大学学报:自然科学版

【发表日期】

：

2020年3期

【关键词】

：

CDK1 磷酸化修饰驱动蛋白 Kif18A 杆状病毒 ATP酶活性 CDKIphosphorylationkinesinKif18AbaculovirusAT

【基金项目】

：

天津市高校“十三五学科领军人才培养计划”资助项目(135205LJ24),天津市科技支撑计划重点资助项目(18YFZCSY00100),新疆维吾尔自治区科技支疆资助项目(2017E0263),天津师范大学应用开发研究基金资助项目(135202XK1708).

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为了探究真核细胞中蛋白激酶CDK1的磷酸化修饰对驱动蛋白分子Kif18A的ATP酶活性的影响,利用昆虫杆状病毒表达系统,在体外表达并纯化Kif18A模拟磷酸化(EE)和非磷酸化(AA)的突变体蛋白(Kif18A-EE,Kif18A-AA).首先构建驱动蛋白Kif18A的杆状病毒表达载体质粒pFast-Bac-FLAG-Kif18A-AA或EE,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑筛选得到阳性克隆.随后提取杆状病毒基因组,转染昆虫细胞SF9后得到能够表达FLAG-Kif18A突变体蛋白的杆状病毒

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