抑制具有PDZ结合域的转录共刺激因子表达对结直肠癌细胞株HCT116凋亡的影响及机制

来源 :中华实验外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yuxk781224
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目的 探讨RNA干扰技术沉默具有PDZ结合域的转录共刺激因子(TAZ)基因表达对结直肠癌细胞凋亡的影响及其机制.方法 合成TAZ的小干扰RNA(TAZ-siRNA)以80 nmol/L转染结肠癌细胞株HCT116,抑制TAZ表达;转染48 h后细胞计数法(CCK-8)检测细胞的活性,流式细胞仪实验检测细胞凋亡率,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测转染各组HCT116细胞TAZ、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和细胞色素C(Cyt C)基因mRNA和蛋白表达.结果 TAZ-siRNA能有效沉默HCT116细胞TAZ基因的表达(24 h抑制率为40.5%,48 h抑制率为82.5%,72 h抑制率为69.8%).有效抑制HCT116细胞中TAZ表达后,转染组细胞的活性(1.01 ±0.12)明显低于阴性对照组和con-siRNA组(1.73 ±0.12和1.68±0.09);凋亡率在TAZ-siRNA组、阴性对照组、con-siRNA组分别为(33.20±0.35)%、(11.67±0.12)%和(12.03±0.11)%.TAZ-siRNA转染后HCT116中TAZ和bcl-2基因和蛋白表达下调,而bax和Cyt C基因表达升高和蛋白的表达上调(P<0.05).结论 利用RNA干扰技术沉默结直肠癌HCT116细胞TAZ基因后可以显著抑制细胞的活性,并能明显促进细胞凋亡,其机制可能是TAZ通过调控线粒体相关凋亡途径影响细胞凋亡.
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