探讨微小RNA(miR)–182调控高糖诱导的心肌细胞肥大的机制。

利用生物信息学方法预测调控Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)的候选miR。在糖尿病组小鼠(db/db小鼠)和对照组小鼠(db/m小鼠)心肌组织中验证所有候选miR的表达，并分别与Rac1mRNA做Pearson相关性分析。体外实验，将原代培养的乳鼠心肌细胞分为对照组(葡萄糖浓5 mmol/L)和高糖组(葡萄糖浓度33 mmol/L，HG组)。光镜下观察各组乳鼠心肌细胞的形态学变化。采用实时逆转录聚合酶链反应(RT–PCR)检测两组乳鼠心肌细胞中miR–182和Rac1 mRNA表达水平。再将原代乳鼠心肌细胞分为4组，分别为正常糖组(葡萄糖浓度5 mmol/L，对照组)、高糖组(葡萄糖浓度33 mmol/L，HG组)、正常糖＋miR–182模拟物组(miR–182组)和高糖＋miR–182模拟物组(HG＋miR–182组)。采用Lipofectamine2000转染miR–182模拟物(终浓度为100 nmol/L)。分别采用RT–PCR和蛋白免疫印迹法检测乳鼠心肌细胞中Rac1、β–肌球蛋白重链(β–MHC)、α–平滑肌肌动蛋白(α–SMA)的mRNA和蛋白表达水平。

生物信息学方法预测到参与调控Rac1的候选miR共6个，分别为miR–182、miR–142–3p、miR–140、miR–101a、miR–429和miR–200b。糖尿病组小鼠心肌组织中miR–182和miR–142–3p mRNA表达水平均明显低于对照组(P均<0.05)，且miR–182、miR–142–3p mRNA均与Rac1 mRNA表达水平呈负相关(相关系数分别为r＝–0.891 02，r＝–0.837 19)，miR–182与Rac1负相关性最为显著。体外实验结果显示HG组乳鼠心肌细胞中miR–182 mRNA表达水平明显低于对照组(P<0.05)，Rac1 mRNA表达水平则明显高于对照组(P<0.05)；光镜下观察HG＋miR–182组乳鼠心肌细胞肥大程度轻于HG组；HG＋miR–182组乳鼠心肌细胞Rac1和β–MHC mRNA及蛋白表达水平均明显高于HG组(P均<0.05)。

miR–182可能通过其靶基因Rac1对高糖诱导的心肌细胞肥大进行调控。