【摘 要】
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目的构建日本血吸虫铁蛋白(SjFer)原核表达质粒.以壳聚糖作佐剂,探讨重组日本血吸虫铁蛋白(rSjFer)粘膜免疫诱导小鼠抗血吸虫感染的保护力.方法用PCR扩增SjFer基因,亚克隆入
【机 构】
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中南大学湘雅医学院病原生物学系,Molecular Parasitology Group
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目的构建日本血吸虫铁蛋白(SjFer)原核表达质粒.以壳聚糖作佐剂,探讨重组日本血吸虫铁蛋白(rSjFer)粘膜免疫诱导小鼠抗血吸虫感染的保护力.方法用PCR扩增SjFer基因,亚克隆入原核表达载体pTWIN1上intein 2的N端,经PCR、限制性酶切筛选阳性重组子并经测序鉴定.将阳性重组子转化大肠埃希菌,在低温和低浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)条件下诱导表达可溶性重组融合蛋白.利用重组融合蛋白的壳聚糖结合功能域(CBD)结合位点,使其与壳聚糖结合,经滴鼻免疫小鼠,于第3次免疫后2周攻击感染,用减虫率和减卵率表示保护力.感染前采血和唾液用ELISA检测抗体.结果成功克隆并表达了rSjFer.rSjFer以壳聚糖作佐剂经滴鼻免疫获得了35.51%的减虫率和52.17%的减卯率.免疫后小鼠血清IgG和IgA及唾液SIgA抗体水平与对照组比较均明显升高.结论获得了rSjFer,该蛋白以壳聚糖作佐剂经粘膜免疫能诱导小鼠产生部分抗血吸虫感染的保护力.
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