【摘 要】
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目的 研究异补骨脂素对人正常肝细胞(L02)增殖、细胞周期和凋亡的影响,并探讨其相关作用机制.方法 以异补骨脂素为研究对象,L02细胞为体外模型,采用MTT试验检测不同浓度异补
【机 构】
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河南中医药大学第一附属医院中药临床评价技术河南省工程实验室,河南郑州450000;河南中医药大学药学院,河南郑州450008
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目的 研究异补骨脂素对人正常肝细胞(L02)增殖、细胞周期和凋亡的影响,并探讨其相关作用机制.方法 以异补骨脂素为研究对象,L02细胞为体外模型,采用MTT试验检测不同浓度异补骨脂素(5、10、20、40、80和100 μg/ml)对LO2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测不同浓度异补骨脂素体外作用24 h对LO2细胞周期分布和凋亡率的影响,通过蛋白印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白E1(Cyclin E1)、细胞周期素依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-like protein4/Bcl-2-associated X protein,Bax)的表达,探讨异补骨脂素毒性的作用机制.结果 MTT试验表明,异补骨脂素对L02细胞生长有明显抑制作用,且抑制作用呈现时间-剂量依赖性;流式细胞仪检测结果显示,各组细胞经异补骨脂素(20、40和80 μg/ml)作用24 h后,细胞总凋亡率分别为5.59％,7.8％和20.91％(P＜0.001),40和80 μg/ml异补骨脂素组L02细胞处于G1期的细胞数增多,S期的细胞减少,说明异补骨脂素能将L02细胞的细胞周期阻滞在G1期;Western blot蛋白质印迹结果显示,同对照组相比,不同浓度异补骨脂素处理L02细胞24 h后,Cyclin D1蛋白表达水平明显下降(P＜0.05),而Bax蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 异补骨脂素可能通过调控周期蛋白及细胞凋亡相关蛋白抑制LO2细胞增殖,并诱导细胞凋亡.
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