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摘要：目的探讨手术配合cIK过继免疫法治疗非小细胞肺癌（NscLc）的疗效。方法40例
NscLc患者按配对的原则分为联合治疗组（手术+免疫治疗）20例，单纯手术组20例；观察两组患者近期疗效、生活质量、免疫学指标、癌胚抗原（cEA）等的变化。结果联合治疗组与单纯手术组K锄0fsky评分总提高率分别为85.0%、45.5%（P<0.05）。两组治疗前T淋巴细胞亚群、B细胞、cEA含量比较差异无统计学意义；联合治疗组治疗后2个月与治疗前比较，cD；和cD+/cD；比值、NK细胞、cEA含量明显提高（P 关键词：肺癌，非小细胞肺；免疫疗法，过继；肺外科手术
随着分子生物学和免疫学理论及科研技术的发展，免疫治疗逐渐成为肿瘤综合治疗的一个重要组成部分。我院采用手术联合CIK免疫过继疗法治疗非小细胞肺癌（NscLc）20例，现报道如下。
1资料与方法
1.1病例选择
选择2013年5月至2014年5月期间在我院首次手术治疗并经病理确诊的肺癌患者40例，男28例，女12例；年龄38。65岁，平均51.6岁。其中右侧肺癌22例，左侧肺癌18例；鳞癌26例，腺癌12例，大细胞癌2例。肿瘤直径<3 cm 5例，3。5 cm 27例，>5 cm 8例。按配对设计的原则分为联合治疗组（手术+cIK）20例及单纯手术组20例。所有病例观察前未使用激素类药物和免疫抑制剂。健康对照组20例，为我院门诊查体人员，男16例，女4例，平均年龄48（30。71）岁，均排除心、肺、肝、肾疾病。
1.2仪器与主要试剂
流式细胞仪FA岱calibⅡ，美国BD公司产品。本研究使用的双色荧光抗体均是FTI℃和PE标记的鼠抗人的单克隆抗体，包括cD3/cD4、cD3/cD8、cI）69、cD25、mA.DR、IgGl/IdGl（同型阴性对照），购自深圳达科为生物技术有限公司。CⅡ（细胞由我院肿瘤生物治疗中心提供。
1.3方法
1.3.1外科手术治疗 、两组患者均取后外侧切口，开胸后探查胸腔内病变，实施相应的手术治疗。联合治疗组行肺叶切除术16例（80%），全肺切除术4例（20%）；单纯手术组行肺叶切除术17例（85%），全肺切除术3例（15%）。术中术后病理检查均证实为肺癌。
1.3.2联合治疗组过继免疫治疗患者手术治疗20 d后，用血细胞分离机封闭式管道采集单个核细胞，无血清培养基AIMV调整细胞数为l×106个/IIll，第1天加入rhIFN一1 1000u/ml，培养24 h后加人rhIL-2 300 U/ml、rhIL一1100 U/llll及OKT 350 ng/ml继续培养，每隔4 d更换培养基，调细胞数为1×106个/Inl，补加rhIL一2 300 u/IIll，每8 d在补加rhIL一2的同时补加OKT 350 ng/ml，两周左右开始收集CIK细胞，生理盐水洗涤3次，加入10%人血白蛋白、用生理盐水配成100 llll后静脉回输，每天回输1次，分3次输完，每次回输细胞数在2×10。6×10，以上，回输前均经细菌、真菌和支原体检测检验结果均为阴性。
1.4观察指标
每例患者均分别于术前1周和术后2个月检测T淋巴细胞亚群CD+、cD：、CD；。B淋巴细胞、NK细胞测定方法采用间接免疫荧光法。每例患者均分别于术前1周和术后2个月检测癌胚抗原（CEA）含量的变化情况。记录患者症状及体征变化，用K锄ofsky计分法判断治疗前及治疗后生活质量的变化。凡在治疗后较疗程开始前评分提高10分或10分以上者为改善；
而下降10分或10分以上者为恶化；提高或下降小于10分者为稳定。总提高率：改善+稳定。相比，cD；、CD：细胞百分率、cD：/CD；比值、自然杀伤（NK）细胞明显增高（P<0.05）；联合治疗组治疗后2个月与单纯手术组同期相比cD：细胞百分率、CD：/
1.5统计学方法
全部数据以sPSSl0.O软件包对结果分别进行f检验及Y 2检验。
2结果
2.1两组治疗前后免疫指标的变化本组免疫检测指标显示：治疗前联合治疗组和单纯手术组免疫指标差异无统计学意义。但它们和对照组相比，CD；、CD：细胞百分率，cDj/CD；比值均较低（P<0.05）。联合治疗组治疗后2个月与治疗前1周CD：比值、NK细胞明显增高（P 2.2两组生活质量的变化
以K锄ofsky评分标准计算，联合治疗组K锄ofsky评分改善11例，稳定6例，恶化3例，总提高率为85%；单纯手术组K姗ofsky评分改善4例，稳定5例，恶化11例，总提高率为45%，两组差异具有统计学意义（P 3讨论
20世纪90年代以来随着医学免疫学及分子遗传学迅速发展，发现肺癌的发生与基因的改变及免疫功能的下降有密切关系，因此肺癌的免疫治疗已经成为肺癌综合治疗中的重要部分。肿瘤免疫学研究表明，肿瘤患者的细胞免疫与肿瘤的发生、发展密切相关。T细胞亚群是构成机体免疫防御的重要因素。淋巴细胞有两个主要亚群，即辅助I生T细胞（Th）CD；和抑制性细胞（Ts）CD；。机体内的免疫平衡主要由这两类细胞相互间影响来维持。cD：T细胞具有调节免疫反应的活性，辅助B细胞产生抗体，分泌细胞因子的作用，而CD；则有免疫抑制和细胞毒性作用。CD：下降或CD；升高均可使两者比例失调，导致机体免疫功能缺陷。国内外很多研究结果指出，多种肿瘤患者有T细胞亚群状态异常和比例失调，其CD+/CD；比值的降低与病变程度相关，往往提示患者的细胞免疫功能处于抑制状态，对识别和杀伤突变细胞的能力下降，从而有利于肿瘤的生长和转移嘲。毒副反应为便秘，发生嗜睡症状者少，可能与我们采用的小剂量以及睡前给药有关，2例患者发生肝酶升高，提示沙利度胺对肝功能有不良影响。本组虽然采用了小剂量华法林仍有3例患者发生了DVT，提示DVT是nal—Dex方案需要特别引起注意的并发症， 其机制可能与沙利度胺加重了MM的凝血病理生理机制的异常有关，同时，高DVT发生率也提示可能需要探索华法林联合低分子肝素等更积极的策略，以预防DvT的发生。
综上可见，Thal—Dex方案可以作为复发难治性M的有效治疗方案，但由于本研究为回顾性分析，且病例有限，宜设置多中心大样本对照研究以进一步研究。
参考文献：
[1]吴沛宏，张福君，赵踢，等.肝动脉栓塞化疗联合CT导向射频消融术治疗中、晚期肝癌的评价[J].中华放射学杂志，2003.37：901—904.
[2]TADATOSHI TAKAYAMA，TERUAKI SEKINE，MASATOSHIMAKUUCHI，et a1.Adoptive immunotherapy to lower postsurgiealrecurI'enee rates of hepatoeellular carcinoma：8 randomised trial[J].1ancet，2000，356：802—807.
[3]LINN Y C，LAu L C，HUl K.Generation of cytokine—inducedkiller ceils from leukaemic samples with in vitro eytotoxicity againstautologous and a1]ogeneic leukaemie blasts[J].Br j Haematol，2002，116（1）：78—86.
[4]施明，张冰，汤紫荣，等.肝癌患者自体细胞因子诱导杀伤细胞治疗后免疫活性细胞的检测及其临床意义[J]，中华医学杂志。2003，83：2 049—2 053.
作者简介：朱哲（1982-），女，黑龙江齐齐哈尔人，技术员，从事生物治疗研究
NscLc患者按配对的原则分为联合治疗组（手术+免疫治疗）20例，单纯手术组20例；观察两组患者近期疗效、生活质量、免疫学指标、癌胚抗原（cEA）等的变化。结果联合治疗组与单纯手术组K锄0fsky评分总提高率分别为85.0%、45.5%（P<0.05）。两组治疗前T淋巴细胞亚群、B细胞、cEA含量比较差异无统计学意义；联合治疗组治疗后2个月与治疗前比较，cD；和cD+/cD；比值、NK细胞、cEA含量明显提高（P
随着分子生物学和免疫学理论及科研技术的发展，免疫治疗逐渐成为肿瘤综合治疗的一个重要组成部分。我院采用手术联合CIK免疫过继疗法治疗非小细胞肺癌（NscLc）20例，现报道如下。
1资料与方法
1.1病例选择
选择2013年5月至2014年5月期间在我院首次手术治疗并经病理确诊的肺癌患者40例，男28例，女12例；年龄38。65岁，平均51.6岁。其中右侧肺癌22例，左侧肺癌18例；鳞癌26例，腺癌12例，大细胞癌2例。肿瘤直径<3 cm 5例，3。5 cm 27例，>5 cm 8例。按配对设计的原则分为联合治疗组（手术+cIK）20例及单纯手术组20例。所有病例观察前未使用激素类药物和免疫抑制剂。健康对照组20例，为我院门诊查体人员，男16例，女4例，平均年龄48（30。71）岁，均排除心、肺、肝、肾疾病。
1.2仪器与主要试剂
流式细胞仪FA岱calibⅡ，美国BD公司产品。本研究使用的双色荧光抗体均是FTI℃和PE标记的鼠抗人的单克隆抗体，包括cD3/cD4、cD3/cD8、cI）69、cD25、mA.DR、IgGl/IdGl（同型阴性对照），购自深圳达科为生物技术有限公司。CⅡ（细胞由我院肿瘤生物治疗中心提供。
1.3方法
1.3.1外科手术治疗 、两组患者均取后外侧切口，开胸后探查胸腔内病变，实施相应的手术治疗。联合治疗组行肺叶切除术16例（80%），全肺切除术4例（20%）；单纯手术组行肺叶切除术17例（85%），全肺切除术3例（15%）。术中术后病理检查均证实为肺癌。
1.3.2联合治疗组过继免疫治疗患者手术治疗20 d后，用血细胞分离机封闭式管道采集单个核细胞，无血清培养基AIMV调整细胞数为l×106个/IIll，第1天加入rhIFN一1 1000u/ml，培养24 h后加人rhIL-2 300 U/ml、rhIL一1100 U/llll及OKT 350 ng/ml继续培养，每隔4 d更换培养基，调细胞数为1×106个/Inl，补加rhIL一2 300 u/IIll，每8 d在补加rhIL一2的同时补加OKT 350 ng/ml，两周左右开始收集CIK细胞，生理盐水洗涤3次，加入10%人血白蛋白、用生理盐水配成100 llll后静脉回输，每天回输1次，分3次输完，每次回输细胞数在2×10。6×10，以上，回输前均经细菌、真菌和支原体检测检验结果均为阴性。
1.4观察指标
每例患者均分别于术前1周和术后2个月检测T淋巴细胞亚群CD+、cD：、CD；。B淋巴细胞、NK细胞测定方法采用间接免疫荧光法。每例患者均分别于术前1周和术后2个月检测癌胚抗原（CEA）含量的变化情况。记录患者症状及体征变化，用K锄ofsky计分法判断治疗前及治疗后生活质量的变化。凡在治疗后较疗程开始前评分提高10分或10分以上者为改善；
而下降10分或10分以上者为恶化；提高或下降小于10分者为稳定。总提高率：改善+稳定。相比，cD；、CD：细胞百分率、cD：/CD；比值、自然杀伤（NK）细胞明显增高（P<0.05）；联合治疗组治疗后2个月与单纯手术组同期相比cD：细胞百分率、CD：/
1.5统计学方法
全部数据以sPSSl0.O软件包对结果分别进行f检验及Y 2检验。
2结果
2.1两组治疗前后免疫指标的变化本组免疫检测指标显示：治疗前联合治疗组和单纯手术组免疫指标差异无统计学意义。但它们和对照组相比，CD；、CD：细胞百分率，cDj/CD；比值均较低（P<0.05）。联合治疗组治疗后2个月与治疗前1周CD：比值、NK细胞明显增高（P
以K锄ofsky评分标准计算，联合治疗组K锄ofsky评分改善11例，稳定6例，恶化3例，总提高率为85%；单纯手术组K姗ofsky评分改善4例，稳定5例，恶化11例，总提高率为45%，两组差异具有统计学意义（P
20世纪90年代以来随着医学免疫学及分子遗传学迅速发展，发现肺癌的发生与基因的改变及免疫功能的下降有密切关系，因此肺癌的免疫治疗已经成为肺癌综合治疗中的重要部分。肿瘤免疫学研究表明，肿瘤患者的细胞免疫与肿瘤的发生、发展密切相关。T细胞亚群是构成机体免疫防御的重要因素。淋巴细胞有两个主要亚群，即辅助I生T细胞（Th）CD；和抑制性细胞（Ts）CD；。机体内的免疫平衡主要由这两类细胞相互间影响来维持。cD：T细胞具有调节免疫反应的活性，辅助B细胞产生抗体，分泌细胞因子的作用，而CD；则有免疫抑制和细胞毒性作用。CD：下降或CD；升高均可使两者比例失调，导致机体免疫功能缺陷。国内外很多研究结果指出，多种肿瘤患者有T细胞亚群状态异常和比例失调，其CD+/CD；比值的降低与病变程度相关，往往提示患者的细胞免疫功能处于抑制状态，对识别和杀伤突变细胞的能力下降，从而有利于肿瘤的生长和转移嘲。毒副反应为便秘，发生嗜睡症状者少，可能与我们采用的小剂量以及睡前给药有关，2例患者发生肝酶升高，提示沙利度胺对肝功能有不良影响。本组虽然采用了小剂量华法林仍有3例患者发生了DVT，提示DVT是nal—Dex方案需要特别引起注意的并发症， 其机制可能与沙利度胺加重了MM的凝血病理生理机制的异常有关，同时，高DVT发生率也提示可能需要探索华法林联合低分子肝素等更积极的策略，以预防DvT的发生。
综上可见，Thal—Dex方案可以作为复发难治性M的有效治疗方案，但由于本研究为回顾性分析，且病例有限，宜设置多中心大样本对照研究以进一步研究。
参考文献：
[1]吴沛宏，张福君，赵踢，等.肝动脉栓塞化疗联合CT导向射频消融术治疗中、晚期肝癌的评价[J].中华放射学杂志，2003.37：901—904.
[2]TADATOSHI TAKAYAMA，TERUAKI SEKINE，MASATOSHIMAKUUCHI，et a1.Adoptive immunotherapy to lower postsurgiealrecurI'enee rates of hepatoeellular carcinoma：8 randomised trial[J].1ancet，2000，356：802—807.
[3]LINN Y C，LAu L C，HUl K.Generation of cytokine—inducedkiller ceils from leukaemic samples with in vitro eytotoxicity againstautologous and a1]ogeneic leukaemie blasts[J].Br j Haematol，2002，116（1）：78—86.
[4]施明，张冰，汤紫荣，等.肝癌患者自体细胞因子诱导杀伤细胞治疗后免疫活性细胞的检测及其临床意义[J]，中华医学杂志。2003，83：2 049—2 053.
作者简介：朱哲（1982-），女，黑龙江齐齐哈尔人，技术员，从事生物治疗研究