【摘 要】
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目的 制备高活性的新型冠状病毒木瓜样蛋白酶(papain-like protease,PLpro),为PLpro小分子抑制剂高通量筛选模型的建立奠定基础.方法 将密码子优化的新型冠状病毒PLpro基因连接到pET-28a载体中,构建重组质粒pET-28a-PLpro.将重组质粒转化到Escherichia coli Rosetta(DE3)感受态细胞中,以十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)鉴定PLpro的原核表达.采用低温诱导策略进行PLpro的可溶表达后,以HisTrapTM亲和层
【机 构】
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皖南医学院/药物筛选与评价研究所,安徽芜湖241002;长春生物制品研究所,长春130012
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目的 制备高活性的新型冠状病毒木瓜样蛋白酶(papain-like protease,PLpro),为PLpro小分子抑制剂高通量筛选模型的建立奠定基础.方法 将密码子优化的新型冠状病毒PLpro基因连接到pET-28a载体中,构建重组质粒pET-28a-PLpro.将重组质粒转化到Escherichia coli Rosetta(DE3)感受态细胞中,以十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)鉴定PLpro的原核表达.采用低温诱导策略进行PLpro的可溶表达后,以HisTrapTM亲和层析柱分离纯化PLpro,再以荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)法测定PLpro的米氏常数(Michaelis constant,Km)值及其水解活性.结果 基因测序与双酶切试验结果表明,成功构建了重组质粒pET-28a-PLpro.SDS-PAGE结果表明,PLpro在大肠杆菌中呈可溶表达,且纯化的PLpro纯度＞90％.FRET结果表明,纯化的PLpro具有良好的水解活性,其Km值为25.38μmol·L-1.结论 新型冠状病毒PLpro在大肠杆菌中成功地进行了可溶表达,且具有良好的酶活性.
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还原应激可以调控氧化还原的能力,进而调控表观遗传修饰,近年来受到了越来越多的关注.作为一种非特异性反应,还原应激代表了氧化还原稳态的失衡,对生物系统有害.还原应激主要表现为还原当量的增加,大量研究表明,还原应激与心血管疾病的发生发展联系密切,在心血管疾病的治疗方面具有良好的应用前景.但还原应激在这些心血管疾病的具体作用尚不完全明确,包括监测还原应激在心血管疾病发生发展过程中的新颖生物标志物和通过抗还原应激治疗实现精准医学的新方法.本文简要介绍了还原应激,以及还原应激在不同心血管病发生发展中的最新进展,以期
1 病例资料rn患者,女,73岁,因“肠MT术后5年余,肝功能指标异常1月余”于2020年12月24日住院.因为无肝疾病史与其他证据,诊断为肝功能不全,药物性肝损伤(drug-induced liver injury,DILI)可能.依据为近来服用华蟾素胶囊,1个月前开始出现乏力纳差,肝生化为总胆红素(total bilirubin,TBil)31.8μmol·L-1,直接胆红素(direct bilirubin,DBil)7.6 μmol·L-1,总胆汁酸(total bile acid,TBA)15.
近年来,大量研究证明颊黏膜黏附膜(mucoadhesive buccal films,MBFs)在全身或局部给药方面表现出高生物利用度,高顺应性,并具有制备难度低,能随时终止给药等优势,已成为最具产业化前景的颊黏膜给药系统.将药物溶解或分散于成膜材料中,通过多种制备工艺制备MBFs.MBFs机械性能直接影响其应用,但目前没有标准的表征方法.因此,本文从处方筛选、制备工艺和质量评价3个方面回顾了近年来MBFs的相关研究和上市制剂,总结了现阶段存在的问题,以期推动其研发和产业化进程.
目的 探讨肺镰刀菌感染患者的治疗方案及临床药师在治疗中发挥的作用.方法 临床药师参与1例肺部镰刀菌感染患者的药学监护,结合国内外文献,从抗真菌药物体外活性及临床疗效等多方面进行分析,协助医师制定治疗策略.结果 临床医师采纳建议,患者经治疗后病情好转,未发生明显不良反应,临床症状稳定后出院.结论 临床药师对患者实施个体化用药方案,可保证患者用药安全,提高药物治疗水平.
颞下颌关节骨关节炎(temporomandibular joint osteoarthritis,TMJOA)是以进行性软骨退变和软骨下骨硬化为主要特征的器质性病变,是颞下颌关节紊乱病的严重破坏阶段.临床症状表现为疼痛、关节交锁、破碎音、开口受限等,严重影响了患者的生存质量.非手术治疗是首选治疗方法,其中药物治疗应用广泛,药物种类繁多,在缓解症状和改善功能上有重要作用.本文对当前TMJOA治疗不同药物的生物学原理、临床疗效及其研究进展进行阐述,以期为TMJOA治疗的药物选择提供依据和指导.
历代本草有关九香虫的记载较多,但描述较为简略,且部分混淆品与其形态相似,导致目前九香虫商品品种混乱,需要深入开展九香虫的本草考证.目前九香虫野生资源骤降,人工养殖规模尚未形成,亟待寻找新药源.本文通过查阅历代中医药典籍、炮制规范,结合现代研究,对九香虫的名称、基原、性味归经、主治功效、炮制沿革进行系统的考证,对九香虫混淆品的药用价值进行分析.考证结果表明,古籍中所述九香虫可能是蝽科多种形似昆虫的统称,中国药典2020年版中九香虫Aspongopus chinensis Dallas是历代中药九香虫主要来源
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结合临床经验阐述影像学在慢性中耳炎中的诊断价值.通过对慢性化脓性中耳炎、分泌性中耳炎、胆脂瘤型中耳炎等颞骨CT影像诊断的特异表现进行剖析,从慢性中耳炎症状影像研究中发现慢性化脓性中耳炎具有解剖参数间关系失衡的特点;影像发现鼻腔、鼻窦病变与慢性中耳炎的发生及进展显著相关;对咽鼓管上隐窝结构影像诊断可判别不同类型中耳炎疾病发病机制等.这些新方法的应用表明影像学在中耳炎诊断中具有很高的临床应用价值,能够有效明确病变特征,提高疾病诊断的准确率.
目的 研究当归挥发油(volatile oil of Angelicae Sinensis Radix,VOAS)对人结直肠癌LOVO细胞自噬的影响及其分子机制.方法 用不同浓度的VOAS(6.25,12.5,25,50和100μg·mL-1)作用于人结肠癌LOVO细胞48 h,CCK8比色法检测VOAS对LOVO细胞增殖的抑制作用.将VOAS 50 μg·mL-1作用于LOVO细胞,AO荧光染色和透射电镜观察细胞自噬情况;Western blotting观察VOAS对自噬相关蛋白LC3B、Beclin-