【摘 要】
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目的研究缺氧对心肌细胞糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthasekinase-3β,GSK-3β)及其偶联的信号转导分子激活的影响。方法将培养的心肌细胞暴露于含1%氧的混合气体中,造成
【机 构】
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第三军医大学军事预防医学院劳动卫生学教研室,重庆师范大学生物系
【基金项目】
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国家重点基础研究发展规划资助项目(“973”项目)(G1999054202)~~
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目的研究缺氧对心肌细胞糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthasekinase-3β,GSK-3β)及其偶联的信号转导分子激活的影响。方法将培养的心肌细胞暴露于含1%氧的混合气体中,造成缺氧0、3、6、12、24h后,用Hoechst33342染色法检测细胞凋亡;MTT法检测细胞存活率;RT-PCRWesternblot方法分别检测心肌细胞GSK-3βmRNA及蛋白磷酸化的变化;RT-PCR法检测caspase-9、-3mRNA表达的改变,分光法检测caspase-9酶活性。结果缺氧24h心肌细胞出现典型的凋亡,细胞存活率显著降低;缺氧3~24hGSK-3βmRNA表达高于对照组,而Ser9位点磷酸化水平在缺氧6~24h明显低于对照组;caspase-9mRNA表达在缺氧3h即开始增高,在随后观察的时相点内持续处于高表达状态,caspase-9酶活性变化趋势与其mRNA表达一致,在缺氧3h开始增高,并在缺氧6~24h逐渐升高;caspase-3mRNA表达在缺氧12h、24h明显高于对照组。结论缺氧可以激活GSK3β,并进一步激活GSK3β下游介导的与细胞凋亡相关的蛋白激酶家族成员caspase-9、-3,从而导致心肌细胞凋亡。
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