目的 探讨黏着斑激酶(FAK)在肿瘤坏死因子α(TNF-α)上调体外培养人角膜上皮细胞明胶酶活性中的作用.方法 实验研究.体外培养无眼部疾患人角膜上皮细胞,将传至3～4代的细胞暴露于含1 μg/L TNF-α(B组)、10 μg/L TNF-α(C组)、100 μg/L TNF-α(D组)的培养基中,对照组(A组)用含等量磷酸盐缓冲液(PBS)的培养基处理,明胶酶谱分析各组条件培养基中基质金属蛋白酶2和9( MMP-2、MMP-9)的活性,免疫印迹法分析FAK总蛋白表达及磷酸化FAK的表达；运用RNA干扰技术特异性抑制人角膜上皮细胞FAK的表达并重复以上过程.统计学方法使用单因素方差分析,各组间比较采用Tukey HSD检验.结果 明胶酶谱分析:与A相比,B、C、D组MMP-2、MMP-9活性均明显上调,差异有统计学意义(A、B、C、D组MMP-2活性表达分别为:124.06 ±4.06、146.72±5.51、241.18±5.65、389.95±4.44,F=2960.91,P=0.000；MMP-9活性表达分别为:122.78±5.86、165.70±7.90、479.49±6.22、495.88±5.03,F=4937.46,P=0.000),各组间比较差异均有统计学意义(MMP-2各组间比较均为P=0.000；MMP-9各组间比较P=0.000)；免疫印迹分析:C、D组中磷酸化FAK较A组增加,差异有统计学意义(C、D组磷酸化FAK分别为:0.52±0.03、0.61 ±0.06;F=431.03,P=0.000),100 μ.g/L TNF-α组较10 μg/L TNF-α组中磷酸化FAK表达增加(P=0.005)；运用RNA干扰技术特异性抑制人角膜上皮细胞FAK表达后,FAK总蛋白较特异性抑制之前明显下调,B、C、D组MMP-2的活性差异无统计学意义(转染后A、B、C、D组MMP-2分别为:55.13±0.66、55.67±0.43、55.49±0.20、55.91±0.37；F=2.73,P=0.079).10、100μg/L TNF-α干预组中MMP-9少量增加(转染后A、B、C、D组MMP-9分别为:80.48±0.39,81.26±0.62,84.43±0.47,85.56±0.61；F=105.80,P=0.000)但增加幅度较转染前明显减小,D组较C组MMP-9活性增强,差异有统计学意义(P=0.019).仅在100 μg/L TNF-α干预组中检测到FAK磷酸化(0.47±0.05),但表达量较抑制前明显减少(t=5.03,P=0.001).结论 FAK信号在TNF-α上调入角膜上皮细胞明胶酶活性过程中发挥一定作用,针对这一过程干预可能对防治角膜病变有意义。
黏着斑激酶在肿瘤坏死因子α上调人角膜上皮细胞明胶酶活性中的作用
【摘 要】
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目的 探讨黏着斑激酶(FAK)在肿瘤坏死因子α(TNF-α)上调体外培养人角膜上皮细胞明胶酶活性中的作用.方法 实验研究.体外培养无眼部疾患人角膜上皮细胞,将传至3～4代的细胞暴露于含1 μg/L TNF-α(B组)、10 μg/L TNF-α(C组)、100 μg/L TNF-α(D组)的培养基中,对照组(A组)用含等量磷酸盐缓冲液(PBS)的培养基处理,明胶酶谱分析各组条件培养基中基质金属蛋白
【机 构】
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430060武汉大学人民医院眼科中心武汉大学人民医院眼科研究所,430060武汉大学人民医院眼科中心武汉大学人民医院眼科研究所,430060武汉大学人民医院眼科中心武汉大学人民医院眼科研究所,4300
【发表日期】
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2011年47期
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