【摘 要】
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目的 探讨乙型肝炎病毒HBx蛋白对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡的影响.方法 将adr亚型HBx基因片段定向插入绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体pEGFP-C1,构建重组体pGFP-HBx.将pEGFP-C
【机 构】
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中山大学附属第三医院感染病科、广东省肝脏疾病研究重点实验室,中山大学附属第三医院中心实验室
【基金项目】
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广东省自然科学基金;教育部留学回国人员科研启动基金;国家自然科学基金
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目的 探讨乙型肝炎病毒HBx蛋白对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡的影响.方法 将adr亚型HBx基因片段定向插入绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体pEGFP-C1,构建重组体pGFP-HBx.将pEGFP-C1、pGFP-HBx转染HepG2细胞,采用G418筛选抗性克隆、荧光显微镜观察及RT-PCR检测HBx基因表达情况以建立稳定表达细胞株HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx.用阿霉素(2.5μg/ml)分别处理HepG2、HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx细胞,处理后不同时间在显微镜下观察细胞形态变化,并用锥虫蓝染色计数死亡细胞;流式细胞仪检测阿霉素处理36 h后细胞凋亡率.结果 HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx细胞传70代后,仍表达强的GFP;RT-PCR检测显示在HepG2/GFP-HBx细胞有HBx基因转录表达.锥虫蓝染色检测表明阿霉素处理的HepG2、HepG2/GFP细胞发生了明显的时间依赖性细胞死亡,而在HepG2/GFP-HBx和对照组细胞未见明显细胞死亡;流式细胞仪检测显示阿霉素处理36 h后,HepG2/GFP-HBx细胞凋亡率为3.94%,明显低于HepG2(59.03%)、HepG2/GFP细胞(61.38%)(P《0.01),而与未处理对照组细胞凋亡率(2.12%,2.78%,2.55%)差异无统计学意义(P》0.05).结论 成功建立了稳定表达GFP,GFP-HBx的HepG2细胞株;HBx能够抑制阿霉素诱导的HepG2细胞凋亡.
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