【摘 要】
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目的:在HEK293细胞中获得Skp2全长基因,构建其高效真核表达载体.方法:提取人HEK293细胞总RNA,反转录合成cDNA,以特异性引物扩增Skp2全长基因并克隆入pBabe载体,筛选阳性克隆
【机 构】
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陕西中医药大学,陕西咸阳,712046青岛大学附属医院,山东青岛,266003;
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目的:在HEK293细胞中获得Skp2全长基因,构建其高效真核表达载体.方法:提取人HEK293细胞总RNA,反转录合成cDNA,以特异性引物扩增Skp2全长基因并克隆入pBabe载体,筛选阳性克隆进行序列测定后,鉴定其表达情况.结果:PCR扩增得到特异性的约1300 bp的片段,序列测定结果表明与国外已发表的序列完全一致;将构建的pBabe-Skp2质粒转入HEK293细胞,与空质粒对照相比,Skp2的mRNA和蛋白表达水平均提高,并且p27蛋白水平降低.结论:构建获得Skp2基因高效真核表达载体,将用于Skp2的功能研究.
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