【摘 要】
：
目的 检测串联siRNA对SW480细胞中增殖诱导配体(APRIL)基因的影响.方法 设计并筛选针对APRIL基因的4条shRNA片段(sh644、sh1451、sh1938、sh2231),分别将其连接至pGenesil-1.1质粒表达载体,形成pGsh644、pGsh1451、pGsh1938、pGsh2231单一表达载体,同时将4条shRNA连接至pGenesil4-T质粒形成pG4串联si
【机 构】
：
226001南通大学附属医院检验科,226007南通大学检验医学研究所,226001南通大学附属医院检验科,226001南通大学附属医院检验科,226007南通大学检验医学研究所,226001南通大学
论文部分内容阅读
目的 检测串联siRNA对SW480细胞中增殖诱导配体(APRIL)基因的影响.方法 设计并筛选针对APRIL基因的4条shRNA片段(sh644、sh1451、sh1938、sh2231),分别将其连接至pGenesil-1.1质粒表达载体,形成pGsh644、pGsh1451、pGsh1938、pGsh2231单一表达载体,同时将4条shRNA连接至pGenesil4-T质粒形成pG4串联siRNA表达载体.阳离子脂质体法转染至结直肠癌细胞株SW480.实时荧光定量PCR和Western blot技术检测SW480细胞中APRIL mRNA和蛋白表达水平.结果 经酶切和测序鉴定,构建的串联siRNA质粒载体符合要求.几条siRNA均可有效抑制SW480细胞APRIL基因的表达,APRIL mRNA的抑制率分别是pGsh644(56.2％)、pGsh1451(49.5％)、pGsh1938 (50.9％)、pGsh2231 (49.2％)、pG4(79.3％).蛋白质表达抑制率分别为pGsh644(56.9％)、pGsh1451(48.7％)、pGsh1938(50.1％)、pGsh2231 (46.4％)、pG4 (87.5％) (P＜0.05).其中以pG4抑制效应最强.结论 与传统单一的siRNA表达载体相比,串联siRNA表达载体大大地敲低了结直肠癌细胞株中APRIL基因的表达,为针对结直肠癌APRIL基因的基因治疗提供研究基础。
其他文献
目的 探讨核因子-KB诱骗剂（NF-KBODNDecoy）处理的DC对Ⅱ型胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠血清IFN-1、IL-10、抗Ⅱ型胶原抗体水平的影响及作用机制。方法建立Ⅱ型胶原诱导性大鼠关节炎模型，NF．s：B诱骗剂处理并负载牛Ⅱ型胶原（BIIC）的大鼠脾脏来源的DC，在初次免疫第5天经尾静脉注射到CIA大鼠体内，并设空白对照组、CIA模型组和B1IC-decoy-DC实验组。42d后观察
内毒素( endotoxin,ET)又名脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),是革兰氏阴性细菌(G-negative)细胞壁上的主要成分,通过激活相关受体介导的信号通路调控炎症及免疫系统.高剂量LPS诱导强烈的炎症反应,导致致死性的脓毒血症或感染性休克.相反,低剂量LPS可诱导一种保护性的耐受状态,对LPS再次刺激时损伤明显减轻[1].耐受现象是生物在长期进化中形成的一种保护性调
由中华医学会、中华医学会器官移植学分会和中华医学会外科学分会器官移植学组共同主办，南京军区福州总医院承办的2012年中国器官移植大会定于2012年10月25-28日在福建厦门召开。参加注册代表者可获得国家Ⅰ类继续医学教育学分8分。诚邀各位专家同道积极投稿参会。征文内容：（1）肝癌肝移植的基础及临床研究。（2）器官捐献临床实践（案例分析与经验分享；伦理问题探讨；相关政策、法规、指南、标准解读等）。
由中国微生物学会主办，南京师范大学、江苏省微生物学会共同承办的“纪念中国微生物学会成立六十周年大会暨2012年中国微生物学会学术年会”，定于2012年10月26-30日在江苏省南京市举行。中国微生物学会、南京师范大学、江苏省微生物学会热忱欢迎全国从事微生物学研究、教学和开发的专家、学者参会进行学术交流、展示各自研究成果。
从浙江丽水市中心医院分离到无重复泛耐药克雷伯菌7株:5株肺炎克雷伯菌(K1-K5)、1株臭鼻克雷伯菌(K6)、1株解鸟氨酸克雷伯菌(K7).菌株鉴定及药敏:取患者痰液标本在血平板上,37℃,18～24 h生长分离单个菌落.采用Vitek2 -compact鉴定仪经GNI卡鉴定为克雷伯菌.取M-H平板上37℃,18 h生长的单个菌落,采用鉴定仪配套的GN13卡鉴定菌株药敏.结果所有菌株对亚胺培南、厄
目的 了解贵阳地区GⅡ.4型诺如病毒变异株的组成及其点突变.方法 监测2010年6-11月于贵阳地区哨点医院就诊的急性胃肠炎病例,收集粪便标本,采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real-time RT-PCR)初步鉴定,随机选取部分GⅡ型诺如病毒阳性标本,采用一步法RT-PCR对其VP1基因区克隆及测序,基因序列与国内外流行的GⅡ.4型诺如病毒进行系统进化及氨基酸位点的突变分析.结果 检测标本4
目的 研究尼古丁对卵白蛋白致敏大鼠CD4T淋巴细胞Thl／Th2平衡的影响。方法卵清白蛋白（OVA）腹腔注射致敏Wistar大鼠，CD4’T淋巴细胞纯化柱分离大鼠脾脏CD4T细胞，体外培养，将细胞随机分为4组：对照组、1μg∥ml尼古丁组、10μg∥ml尼古丁组、100μg∥ml尼古丁组（各组加等浓度的OVA），不同浓度尼古丁刺激24h，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清液IFN-y和
目的 用分子克隆方法构建靶基因为CD4的microRNA的GFP报告载体,并观察其对MT4细胞CD4分子表达的影响.方法 在microRNA在线预测软件中寻找靶基因为CD4的microRNA.设计hsa-mir-181a基因引物,PCR后将产物与T载体连接,双酶切后与pEGFP-N1载体连接.用菌液PCR及测序鉴定正确连接入pEGFP-N1载体.测序正确后电转染MT4细胞系.用荧光定量PCR检测m
目的 评价18组抗菌药物组合对临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌（MDRAB）的体外抗菌效应。方法收集2009年10月-2010年5月首都医科大学附属北京友谊医院临床检验中心细菌室分离的非重复鲍曼不动杆菌，肉汤微量稀释法测定抗菌药物单药MIC，棋盘肉汤微量稀释法测定联合用药的部分抑菌浓度（FIC）值。根据FIC值判别药物组合的作用类型。对实验菌株，同一药物组合表现矛盾作用的，用PCR扩增其外排泵基因。
目的 观察以高危型人乳头瘤病毒16型(HPV16) E6和E7基因编码的多肽E613-21(KLPDLCTEL)和E786-94(TLGIVCPI)为抗原负载的树突状细胞(DC)体外诱导特异性CTL的能力.方法 采集HPV+HLA-A2+宫颈癌患者外周血,分离单核细胞(Mo)与外周淋巴细胞(PBL)；将Mo诱导成DC后负载E6和E7多肽,用其反复致敏PBL(3次)；ELISA法检测致敏细胞上清细胞