【摘 要】
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目的 研究miRNA-195在宫颈癌组织和细胞中的表达,分析其对宫颈癌细胞增殖、迁移的影响和作用机制.方法 检测35例临床宫颈癌组织及其对应癌旁正常组织中miRNA-195,通过Kaplan-Meier Plotter数据库分析其与宫颈癌患者预后的关系;采用细胞增殖实验和划痕迁移实验验证miRNA-195对宫颈癌siHa,Hela细胞增殖、迁移的影响;通过microRNA数据库预测miRNA-195的靶基因,双荧光素酶基因实验验证靶向结合关系;qRT-PCR验证miRNA-195对靶基因的调控;分析宫颈癌
【机 构】
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河北北方学院附属第一医院妇科,河北张家口 075000
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目的 研究miRNA-195在宫颈癌组织和细胞中的表达,分析其对宫颈癌细胞增殖、迁移的影响和作用机制.方法 检测35例临床宫颈癌组织及其对应癌旁正常组织中miRNA-195,通过Kaplan-Meier Plotter数据库分析其与宫颈癌患者预后的关系;采用细胞增殖实验和划痕迁移实验验证miRNA-195对宫颈癌siHa,Hela细胞增殖、迁移的影响;通过microRNA数据库预测miRNA-195的靶基因,双荧光素酶基因实验验证靶向结合关系;qRT-PCR验证miRNA-195对靶基因的调控;分析宫颈癌中靶基因的表达作用及与miRNA-195的相关性,通过细胞回补实验验证miRNA-195是否通过靶向调控蛋白表达在宫颈癌中发挥功能.结果 宫颈癌组织中miRNA-195相对表达低于癌旁正常组织(21.03±5.17 vs 40.67±7.92),差异有统计学意义(t=12.285,P<0.001),且具有低表达预后差的临床特征(Logrank P=0.032).过表达miRNA-195抑制了宫颈癌细胞的增殖(t=6.725～21.433,均P<0.01)和迁移速率(t=12.443,16.749,均P<0.001).CCND2和MYB是miRNA-195的靶基因,过表达miRNA-195显著抑制了CCND2和MYB mRNA的蛋白表达(P<0.01).宫颈癌组织中CCND2较癌旁正常组织显著高表达(52.67±4.79 vs 39.86±6.39),差异有统计学意义(t=12.453,P<0.001);MYB较癌旁正常组织显著高表达(43.06±6.43 vs 22.07±6.85),差异有统计学意义(t=13.217,P<0.001);且分别与miRNA-195表达呈负相关(r=-0.726,-0.592,均P<0.05).过表达CCND2和MYB显著促进了宫颈癌细胞的增殖和迁移速率,敲低CCND2和MYB表达则得到与之相反的结果(F=144.947,875.160,均P<0.001);在过表达miRNA-195细胞中分别回补过表达CCND2和MYB后细胞增殖、迁移速率基本回归到正常水平.结论 miRNA-195可通过靶向调控CCND2和MYB表达抑制宫颈癌癌细胞的增殖和迁移,进而参与宫颈癌的发生发展.
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