分析siRNA介导独立生长因子1(GFI-1)基因沉默对不典型慢性髓细胞白血病(aCML)NT1细胞生长和增殖的影响。
方法采用细胞转染试剂Lipofectamine 2000，将siRNA导入对数生长期的NT1细胞，实验分为空白对照组(加入PBS和脂质体复合物)、阴性对照组(加入阴性干扰序列和脂质体复合物)和GFI-1基因干扰组(加入针对GFI-1的干扰序列和脂质体复合物)。采用实时荧光定量PCR法检测GFI-1 mRNA的表达水平，Western blot法检测GFI-1蛋白的表达水平，四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测GFI-1 siRNA对NT1细胞增殖的影响，流式细胞仪检测GFI-1 siRNA对NT1细胞周期的影响。裸鼠移植瘤实验检测GFI-1 siRNA对裸鼠成瘤的影响。
结果实时荧光定量PCR检测显示，空白对照组、阴性对照组和基因干扰组的GFI-1 mRNA表达水平分别为1.010±0.005、0.918±0.006和0.367±0.017，基因干扰组与空白对照组和阴性对照组的差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测显示，基因干扰组的GFI-1蛋白表达水平明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。MTT法检测显示，空白对照组、阴性对照组和基因干扰组的A值分别为1.193±0.064、1.096±0.049和0.667±0.059，基因干扰组的细胞增殖能力明显低于空白对照组和阴性对照组(P＝0.023)。流式细胞仪检测显示，空白对照组、阴性对照组和基因干扰组的G0/G1期细胞比例分别为(48.6±3.2)%、(53.3±4.5)%和(66.7±3.8)%，基因干扰组与空白对照组和阴性对照组的差异有统计学意义(P<0.05)。空白对照组、阴性对照组和基因干扰组的sub-G1期细胞比例分别为(2.0±3.6)%、(1.9±1.3)%和(8.2±2.5)%，基因干扰组与空白对照组和阴性对照组的差异有统计学意义(P<0.05)。裸鼠移植瘤实验显示，空白对照组、阴性对照组和基因干扰组裸鼠的肿瘤重量分别为(0.92±0.04)g、(0.83±0.06)g和(0.37±0.02)g，基因干扰组裸鼠的肿瘤重量明显小于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。
结论siRNA介导GFI-1基因沉默可抑制NT1细胞生长与增殖，可能为aCML的治疗提供新的靶点。