【摘 要】
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目的:为了更好地评价基因编辑效率,满足高通量筛选应用中快速、高效的检测要求,在细胞上建立一个原位检测方法具有重要的意义.通过检测荧光蛋白信号强度的变化可以评价CRISPR
【机 构】
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国防科技大学新型陶瓷纤维及其复合材料重点实验室 长沙410073;军事医学研究院生物工程研究所 北京100071;国防科技大学新型陶瓷纤维及其复合材料重点实验室 长沙410073;军事医学研究院生物工
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目的:为了更好地评价基因编辑效率,满足高通量筛选应用中快速、高效的检测要求,在细胞上建立一个原位检测方法具有重要的意义.通过检测荧光蛋白信号强度的变化可以评价CRISPR系统在细胞中的基因编辑情况,然而这一方法的效率受限于荧光蛋白较长的半衰期.方法:将鸟氨酸脱羧酶降解结构域(含PEST序列)与EGFP融合,通过慢病毒系统感染HEK-293T细胞,获得了表达单拷贝、EGFP-PEST报告基因的稳转细胞系.结果:与EGFP相比,EGFP-PEST在细胞内的降解速度明显加快,荧光水平在4h内显著降低.利用该模型比较了3种商品化脂质体介导的CRISPR/Cas9基因编辑效率,能够在2～4d实现定性和定量评价.结论:这一模型能够快速、灵敏地指示基因编辑效果,可以用于不同CRISPR系统或新递送工具的高通量筛选和评价.
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