【摘 要】
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背景:Y-27632是Rho相关卷曲螺旋形成的蛋白激酶抑制剂,已被证实具有调节干细胞的自我更新、促进克隆形成和存活的作用。另外,其对神经细胞生长和发育也具有调节和保护作用。
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背景:Y-27632是Rho相关卷曲螺旋形成的蛋白激酶抑制剂,已被证实具有调节干细胞的自我更新、促进克隆形成和存活的作用。另外,其对神经细胞生长和发育也具有调节和保护作用。而如何提高胚胎干细胞向类神经元细胞分化是神经损伤修复和神经再生领域热点问题。目的:探讨Y-27632对人胚胎干细胞向类神经元细胞分化效率的作用。方法:取16代人胚胎干细胞复苏后,进行形态观察和染色鉴定,采用悬浮培养法制备类胚体,培养8 d后,进行分组贴壁培养:对照组细胞为常规Sato培养基诱导分化;Y-27632组分别在Sato培养基加入5,10,20,40μmol/L Y-27632。培养10 d后进行染色鉴定;10-18 d后,进行免疫荧光染色检测胚胎干细胞分化效率和类神经元细胞突起生长情况。结果与结论:(1)人胚胎干细胞共表达Oct4和SSEA-3干细胞特异蛋白;(2)悬浮分化培养8 d后,进一步贴壁培养10 d,可观察到具有神经形态,且表达Tuj-1的类神经元细胞;(3)经不同浓度的Y-27632诱导后,免疫荧光染色发现贴壁细胞数和Tuj-1阳性细胞数显著增加,提示胚胎干细胞向类神经元细胞分化速率加快,且在浓度为10μmol/L时最为明显;(4)分化培养18 d后,免疫荧光染色显示,与对照组相比,10μmol/L Y-27632组的Tuj-1阳性细胞数及突起数和突起长度显著增加;(5)结果说明,Y-27632不仅能够促进人胚胎干细胞向类神经元细胞分化,同时促进类神经元细胞突起的生长。
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