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【摘要】 目的 观察窒息新生儿尿激活素A含量的变化,探讨尿激活素A与新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic ischemic encephalopathy;HIE)的关系,为HIE的诊断及病情判断提供重要依据。方法 选择50例窒息足月新生儿为观察组,随机选择48例同期出生正常足月新生儿为正常对照组。生后7 d内根据新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准和临床分度,将50例窒息新生儿分成轻度HIE组30例、中重度HIE组20例。采用ELISA方法检测两组新生儿生后不同时间(2、12、24、48、72h)尿激活素A的含量。结果 中重度HIE组尿激活素A含量显著高于正常对照组(P<0.01)和轻度HIE组(P<0.01);正常对照组和轻度HIE组尿激活素A含量无显著性差异(P>0.05)。以尿激活素A含量>70 ng/L为临界值判断中重度HIE发生,2 h尿激活素A含量的敏感度为82%、特异度为99%;12~72 h尿激活素A含量的敏感度为100%、特异度为98%。结论 尿激活素A含量与HIE病情程度呈正相关,对判断中重度HIE的发生有高度的敏感性及特异性,为诊断中重度HIE提供重要依据。
【关键词】尿激活素A;新生儿;缺氧缺血;诊断;病情判断
The value of urinary activin A on diagnosis and illness situation of neonatal hypoxic ischemic encephalopathy
WANG Bao hong,LIU Xiu xiang,ZHANG Hai hong.Department of pediatrics,Affiliated Hospital of Binzhou Medical University,Binzhou 256000,China
【Abstract】 Objective To explore the relationship between urinary activin A and neonatal hypoxic ischemic encephalopathy(HIE)by observing the change of urinary activin A in neonates with asphyxia,Provides the important basis for the HIE diagnosis and the condition judgment.Methods 50 cases of neonatal asphyxia term were the observation group,48 cases of normal full term newborns born in the same period were stochastically the normal control group.Within 7 days after birth,50 cases of neonatal asphyxia were divided into the group of 30 patients with mild HIE and the group of 20 patients with moderate and severe HIE,according to diagnostic criteria and clinical grading of neonatal hypoxic ischemic encephalopathy.the levels of urinary activin A in two groups after birth different time(2, 12, 24, 48, 72 h) were determined by using ELISA method.
Results The levels of urinary activin A in moderate and severe HIE group was significantly higher than the normal control group(P<0.01)and mild HIE group(P<0.01); The levels of urinary activin A in the normal control group and mild HIE group showed no significant differences(P>0.05).Urinary activin A levels>70 ng/L for the critical value to determine the occurrence of moderate and severe HIE,the sensitivity and specificity of 2 h urinary activin A levels were separately 82%and 99%;the sensitivity and specificity of 12 72 h urinary activin A levels were separately 100%and 98%.Conclusion The correlation between the levels of urinary activin A and the severity of HIE was positive,the levels of urinary activin A had a high degree of sensitivity and specificity for determine the incidence of moderate and severe HIE,it provided an important basis for diagnosis of moderate and severe HIE.
【Key words】Urinary activin A; Newborn; Hypoxia ischemia; Diagnosis; Condition to determine
新生儿HIE是围产期各种因素引起缺氧缺血导致的脑部损伤,病死率及致残率很高,是新生儿时期造成脑瘫的主要原因之一[1]。如何及时诊断、评估预后及系统治疗成为目前研究热点。本研究通过对窒息及正常足月新生儿生后不同时间(2、12、24、48、72 h)尿中激活素A含量测定,探讨尿激活素A含量与HIE的关系,以期获得一种诊断HIE及判断HIE病情程度的方法。
1 资料与方法
1.1 研究对象标准及分组 (1)观察组:选择2008年6月至2009年8月在我院产科出生的有窒息史的足月新生儿50例,男26例,女24例。窒息诊断标准[2]为至少具备以下情况中的3条:①严重胎儿宫内窘迫,如胎动减少,胎心率<100次/min或胎动增加,胎心率≥160次/min;②胎粪污染羊水呈Ⅲ度以上混浊;③1 min Apgar评分≤3分;④5 min Apgar评分≤6分;⑤出生后需气管插管正压呼吸达3 min以上;⑥排除母亲服药、先天性感染、产时感染。生后7 d内根据新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准和临床分度[3],分成轻度HIE组30例,男16例,女14例;胎龄(38.5±1.2)周;出生体质量(3282±410)g和中重度HIE组20例,男10例,女10例;胎龄(38.9±1.3)周;出生体质量(3350±415)g。(2)正常对照组:随机选择同期出生正常足月新生儿48例男25例,女23例;胎龄(39.0±1.1)周;出生体质量(3389±356)g,并符合下列条件:①母亲健康;②胎儿各项监测均正常;③生后1周内健康。上述3组新生儿在性别、胎龄、出生体重方面均无显著性差异。
1.2 标本采集 收集所有新生儿生后不同时间(2、12、24、48、72 h)尿液1 ml,离心10 min(900转/min),取上清液 70℃保存。所有新生儿于娩出尚未建立呼吸时,抽取脐动脉血1 ml并立即封闭,血标本于10 min内测定。
1.3 指标检测 ①所有新生儿生后不同时间(2、12、24、48、72 h)尿激活素A含量测定,应用ELISA方法检测;②所有新生儿脐动脉血气分析,采用IL 1610型血气分析仪(美国库尔特公司生产),测定pH、PCO2、 BE。
1.4 统计学方法 数据均采用均数±标准差(x±s)表示;用单因素方差分析方法比较各组不同时间点尿激活素A含量,用秩和检验方法比较血气分析各指标。用四格表法计算敏感度及特异度。
2 结果
2.1 3组脐动脉血气分析比较 正常组pH、PCO2、 BE与其他两组均有显著性差异(P<0.05);但轻度与中重度HIE组无显著性差异(P>0.05)。见表1。
表1
3组新生儿脐动脉血气分析结果(x±s)
组别例数(n)pHPCO2(KPa) BE(mmol/L)
正常对照组487.260±0.0496.23±1.406.18±4.16
轻度HIE组306.945±0.123*12.22±0.79*18.45±1.51*
中重度HIE组206.931±0.180#11.32±1.51#19.32±0.84#
注:与正常对照组比较,*P<0.05;与轻度HIE组比较,#P>0.05
2.2 3组尿激活素A含量比较 中重度HIE组尿激活素A含量显著高于正常对照组(P<0.01)和轻度HIE组(P<0.01);中重度HIE组尿激活素A含量与缺氧缺血性脑损伤部位无关;伴有脑出血的中重度HIE组尿激活素A含量明显高于正常对照组(P<0.005)和轻度HIE组(P<0.005);不伴有脑出血的中重度HIE组尿激活素A含量亦明显高于正常对照组(P<0.01)和轻度HIE组(P<0.01);正常对照组和轻度HIE组尿激活素A含量无显著性差异(P>0.05)。见表2、图1。
表2
3组尿激活素A含量比较(x±s;ng/L)
组别例数2 h12 h24 h48 h72 h
正常对照组4851±0.5445±0.5353±0.5151±0.5253±0.55
轻度HIE组3055±0.55*52±0.53*58±0.52*56±0.50*57±0.54*
中重度HIE组20220±89#**200±92#**210±88#**190±95#**200±93#**
注:与正常对照组比较,*P>0.05、#P<0.01;与轻度HIE组比较,**P<0.01
表3
尿激活素A含量判断中重度HIE发生的
敏感度、特异度(%)
组别曲线下面积(95%可信区间;%)临界值(ng/L)敏感度(%)特异度(%)
2 h0.90(0.80~0.96)>708299
12 h0.89(0.80~0.93)>608098
24 h0.88(0.77~0.95)>707699
48 h0.91(0.80~0.95)>509196
72 h0.97(0.90~0.97)>809199
2.3 中重度HIE诊断的特异度及敏感度(%) 以尿激活素A含量>70 ng/L为临界值判断中重度HIE发生,2 h尿激活素A含量的敏感度为82%、特异度为99%;12~72 h尿激活素A含量的敏感度为100%、特异度为98%。
3 讨论
HIE是围产期各种因素引起缺氧缺血导致的脑部损伤,病死率及致残率很高,是新生儿时期造成脑损伤的重要原因。其发病机制复杂,涉及多种因素,其中免疫因素如免疫细胞、细胞因子、补体系统等,近年来备受关注。激活素A(activin A,ACT A)是近年来发现的一种新型细胞因子,属于转化生长因子2β(transforming growth factor2β,TGF2β)的超家族成员,因具有广泛的生理作用而逐渐成为研究热点。然而,在HIE发生的早期阶段,有生物活性的ACT A与HIE之间的关系,国外研究资料少,国内尚未见研究报道,探讨二者之间的关系,可为诊断HIE及判断HIE病情程度提供重要依据。
激活素(ACT)是一种主要由性腺分泌的水溶性糖蛋白激素,属于转化生长因子2β超家族成员,最初在卵泡液中分离纯化获得,与抑制素因能分别特异的促进和抑制垂体细胞分泌卵泡刺激素而得名[4]。已证实ACT有3种基本形式:ACT A(βAβA)、ACT B(βBβB)及ACT AB(βAβB),三种分子结构具有类似的生物学活性,其中ACT A是一种新型的多功能细胞因子,广泛存在于人和其他动物的多个组织器官中,参与调节胚胎发育、形成、红细胞分化、肝实质细胞分化、神经细胞存活等生理过程。Sup ramaniam等[5]在对绵羊的动物实验表明孕晚期母体缺氧引起胎盘供氧不足时,母体、脐血和羊水的ACT A水平显著升高,且子宫血流减少的越多,ACT A升高的水平就越高,说明缺氧是体内ACT A水平增高的诱因,ACT A水平可间接反映胎儿宫内缺氧的程度。邱玉芳等[6]检测40例正常妊娠对照组及35例胎儿宫内窘迫孕妇的新生儿脐动脉血ACT A水平,同时行脐动脉血血气分析,结果宫内窘迫孕妇组新生儿脐血ACT A 水平明显增加,且与脐血pH、PaO2、BE呈显著负相关,与PaCO2呈正相关,提示ACT A可作为一项新的临床指标反映胎儿宫内缺氧的程度从而预测HIE的发生。Florio等[7]对HIE新生儿的脑脊液ACT A进行检测,发现较对照组明显增加,其中ACT A>1300 ng/L对于HIE诊断的敏感性和特异性均为100%,同时通过彩超和其他方法均未发现异常,说明ACT A的增加对早期预测新生儿HIE有重要的价值;对≤32周早产儿进行临床对照试验,发现脑室内出血的早产儿脐血ACT A 水平明显增加,当ACT A水平>800 ng/L时,对颅内出血诊断的敏感性和特异性分别为100%和93%,从而早期发现因颅内出血引起HIE的早产儿[8]。近年研究证实,ACT A水平的增加与HIE的发生有一定的关系,且呈正相关,即随着大脑缺氧/窒息程度的增加,血中ACT A水平亦增加。因为ACT A的半衰期短(估计为1 h)且是一种低分子量蛋白(<28 kDa),故它很容易通过一个被动的机制排泄到尿液中[9]。据此推测,尿液中ACT A水平的测定可以用来缺氧缺血性脑病的诊断及病情判断,对判断预后、指导治疗提供重要的参考依据。
本研究通过对所有新生儿生后即刻行动脉血气分析,发现正常对照组与轻度HIE组、中重度HIE组有显著性差异(P<0.05),而轻度HIE组与中重度HIE组无显著性差异(P>0.05),提示脐动脉血气分析虽然能较准确地反映患儿出生时缺氧程度,但却不能判断HIE脑损伤程度。通过比较正常对照组、轻度HIE组、中重度HIE组不同时间点的尿激活素A含量发现:中重度HIE组尿激活素A含量显著高于正常对照组(P<0.01)和轻度HIE组(P<0.01),正常对照组和轻度HIE组尿激活素A含量无显著性差异(P>0.05);尿激活素A含量与HIE病情程度呈正相关,与缺氧缺血性脑损伤的部位及有无颅内出血无关;以尿激活素A含量>70 ng/L为临值判断中重度HIE的发生,各时间段尿激活素A含量均有高度的敏感性及特异性,为诊断中重度HIE、判断疗效、评估预后提供可靠依据。该研究技术还具有标本易搜集、患儿痛苦小、家长易接受、花费低及检测速度快等优点,在基层医院亦可开展,具有广阔的发展前景。
【关键词】尿激活素A;新生儿;缺氧缺血;诊断;病情判断
The value of urinary activin A on diagnosis and illness situation of neonatal hypoxic ischemic encephalopathy
WANG Bao hong,LIU Xiu xiang,ZHANG Hai hong.Department of pediatrics,Affiliated Hospital of Binzhou Medical University,Binzhou 256000,China
【Abstract】 Objective To explore the relationship between urinary activin A and neonatal hypoxic ischemic encephalopathy(HIE)by observing the change of urinary activin A in neonates with asphyxia,Provides the important basis for the HIE diagnosis and the condition judgment.Methods 50 cases of neonatal asphyxia term were the observation group,48 cases of normal full term newborns born in the same period were stochastically the normal control group.Within 7 days after birth,50 cases of neonatal asphyxia were divided into the group of 30 patients with mild HIE and the group of 20 patients with moderate and severe HIE,according to diagnostic criteria and clinical grading of neonatal hypoxic ischemic encephalopathy.the levels of urinary activin A in two groups after birth different time(2, 12, 24, 48, 72 h) were determined by using ELISA method.
Results The levels of urinary activin A in moderate and severe HIE group was significantly higher than the normal control group(P<0.01)and mild HIE group(P<0.01); The levels of urinary activin A in the normal control group and mild HIE group showed no significant differences(P>0.05).Urinary activin A levels>70 ng/L for the critical value to determine the occurrence of moderate and severe HIE,the sensitivity and specificity of 2 h urinary activin A levels were separately 82%and 99%;the sensitivity and specificity of 12 72 h urinary activin A levels were separately 100%and 98%.Conclusion The correlation between the levels of urinary activin A and the severity of HIE was positive,the levels of urinary activin A had a high degree of sensitivity and specificity for determine the incidence of moderate and severe HIE,it provided an important basis for diagnosis of moderate and severe HIE.
【Key words】Urinary activin A; Newborn; Hypoxia ischemia; Diagnosis; Condition to determine
新生儿HIE是围产期各种因素引起缺氧缺血导致的脑部损伤,病死率及致残率很高,是新生儿时期造成脑瘫的主要原因之一[1]。如何及时诊断、评估预后及系统治疗成为目前研究热点。本研究通过对窒息及正常足月新生儿生后不同时间(2、12、24、48、72 h)尿中激活素A含量测定,探讨尿激活素A含量与HIE的关系,以期获得一种诊断HIE及判断HIE病情程度的方法。
1 资料与方法
1.1 研究对象标准及分组 (1)观察组:选择2008年6月至2009年8月在我院产科出生的有窒息史的足月新生儿50例,男26例,女24例。窒息诊断标准[2]为至少具备以下情况中的3条:①严重胎儿宫内窘迫,如胎动减少,胎心率<100次/min或胎动增加,胎心率≥160次/min;②胎粪污染羊水呈Ⅲ度以上混浊;③1 min Apgar评分≤3分;④5 min Apgar评分≤6分;⑤出生后需气管插管正压呼吸达3 min以上;⑥排除母亲服药、先天性感染、产时感染。生后7 d内根据新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准和临床分度[3],分成轻度HIE组30例,男16例,女14例;胎龄(38.5±1.2)周;出生体质量(3282±410)g和中重度HIE组20例,男10例,女10例;胎龄(38.9±1.3)周;出生体质量(3350±415)g。(2)正常对照组:随机选择同期出生正常足月新生儿48例男25例,女23例;胎龄(39.0±1.1)周;出生体质量(3389±356)g,并符合下列条件:①母亲健康;②胎儿各项监测均正常;③生后1周内健康。上述3组新生儿在性别、胎龄、出生体重方面均无显著性差异。
1.2 标本采集 收集所有新生儿生后不同时间(2、12、24、48、72 h)尿液1 ml,离心10 min(900转/min),取上清液 70℃保存。所有新生儿于娩出尚未建立呼吸时,抽取脐动脉血1 ml并立即封闭,血标本于10 min内测定。
1.3 指标检测 ①所有新生儿生后不同时间(2、12、24、48、72 h)尿激活素A含量测定,应用ELISA方法检测;②所有新生儿脐动脉血气分析,采用IL 1610型血气分析仪(美国库尔特公司生产),测定pH、PCO2、 BE。
1.4 统计学方法 数据均采用均数±标准差(x±s)表示;用单因素方差分析方法比较各组不同时间点尿激活素A含量,用秩和检验方法比较血气分析各指标。用四格表法计算敏感度及特异度。
2 结果
2.1 3组脐动脉血气分析比较 正常组pH、PCO2、 BE与其他两组均有显著性差异(P<0.05);但轻度与中重度HIE组无显著性差异(P>0.05)。见表1。
表1
3组新生儿脐动脉血气分析结果(x±s)
组别例数(n)pHPCO2(KPa) BE(mmol/L)
正常对照组487.260±0.0496.23±1.406.18±4.16
轻度HIE组306.945±0.123*12.22±0.79*18.45±1.51*
中重度HIE组206.931±0.180#11.32±1.51#19.32±0.84#
注:与正常对照组比较,*P<0.05;与轻度HIE组比较,#P>0.05
2.2 3组尿激活素A含量比较 中重度HIE组尿激活素A含量显著高于正常对照组(P<0.01)和轻度HIE组(P<0.01);中重度HIE组尿激活素A含量与缺氧缺血性脑损伤部位无关;伴有脑出血的中重度HIE组尿激活素A含量明显高于正常对照组(P<0.005)和轻度HIE组(P<0.005);不伴有脑出血的中重度HIE组尿激活素A含量亦明显高于正常对照组(P<0.01)和轻度HIE组(P<0.01);正常对照组和轻度HIE组尿激活素A含量无显著性差异(P>0.05)。见表2、图1。
表2
3组尿激活素A含量比较(x±s;ng/L)
组别例数2 h12 h24 h48 h72 h
正常对照组4851±0.5445±0.5353±0.5151±0.5253±0.55
轻度HIE组3055±0.55*52±0.53*58±0.52*56±0.50*57±0.54*
中重度HIE组20220±89#**200±92#**210±88#**190±95#**200±93#**
注:与正常对照组比较,*P>0.05、#P<0.01;与轻度HIE组比较,**P<0.01
表3
尿激活素A含量判断中重度HIE发生的
敏感度、特异度(%)
组别曲线下面积(95%可信区间;%)临界值(ng/L)敏感度(%)特异度(%)
2 h0.90(0.80~0.96)>708299
12 h0.89(0.80~0.93)>608098
24 h0.88(0.77~0.95)>707699
48 h0.91(0.80~0.95)>509196
72 h0.97(0.90~0.97)>809199
2.3 中重度HIE诊断的特异度及敏感度(%) 以尿激活素A含量>70 ng/L为临界值判断中重度HIE发生,2 h尿激活素A含量的敏感度为82%、特异度为99%;12~72 h尿激活素A含量的敏感度为100%、特异度为98%。
3 讨论
HIE是围产期各种因素引起缺氧缺血导致的脑部损伤,病死率及致残率很高,是新生儿时期造成脑损伤的重要原因。其发病机制复杂,涉及多种因素,其中免疫因素如免疫细胞、细胞因子、补体系统等,近年来备受关注。激活素A(activin A,ACT A)是近年来发现的一种新型细胞因子,属于转化生长因子2β(transforming growth factor2β,TGF2β)的超家族成员,因具有广泛的生理作用而逐渐成为研究热点。然而,在HIE发生的早期阶段,有生物活性的ACT A与HIE之间的关系,国外研究资料少,国内尚未见研究报道,探讨二者之间的关系,可为诊断HIE及判断HIE病情程度提供重要依据。
激活素(ACT)是一种主要由性腺分泌的水溶性糖蛋白激素,属于转化生长因子2β超家族成员,最初在卵泡液中分离纯化获得,与抑制素因能分别特异的促进和抑制垂体细胞分泌卵泡刺激素而得名[4]。已证实ACT有3种基本形式:ACT A(βAβA)、ACT B(βBβB)及ACT AB(βAβB),三种分子结构具有类似的生物学活性,其中ACT A是一种新型的多功能细胞因子,广泛存在于人和其他动物的多个组织器官中,参与调节胚胎发育、形成、红细胞分化、肝实质细胞分化、神经细胞存活等生理过程。Sup ramaniam等[5]在对绵羊的动物实验表明孕晚期母体缺氧引起胎盘供氧不足时,母体、脐血和羊水的ACT A水平显著升高,且子宫血流减少的越多,ACT A升高的水平就越高,说明缺氧是体内ACT A水平增高的诱因,ACT A水平可间接反映胎儿宫内缺氧的程度。邱玉芳等[6]检测40例正常妊娠对照组及35例胎儿宫内窘迫孕妇的新生儿脐动脉血ACT A水平,同时行脐动脉血血气分析,结果宫内窘迫孕妇组新生儿脐血ACT A 水平明显增加,且与脐血pH、PaO2、BE呈显著负相关,与PaCO2呈正相关,提示ACT A可作为一项新的临床指标反映胎儿宫内缺氧的程度从而预测HIE的发生。Florio等[7]对HIE新生儿的脑脊液ACT A进行检测,发现较对照组明显增加,其中ACT A>1300 ng/L对于HIE诊断的敏感性和特异性均为100%,同时通过彩超和其他方法均未发现异常,说明ACT A的增加对早期预测新生儿HIE有重要的价值;对≤32周早产儿进行临床对照试验,发现脑室内出血的早产儿脐血ACT A 水平明显增加,当ACT A水平>800 ng/L时,对颅内出血诊断的敏感性和特异性分别为100%和93%,从而早期发现因颅内出血引起HIE的早产儿[8]。近年研究证实,ACT A水平的增加与HIE的发生有一定的关系,且呈正相关,即随着大脑缺氧/窒息程度的增加,血中ACT A水平亦增加。因为ACT A的半衰期短(估计为1 h)且是一种低分子量蛋白(<28 kDa),故它很容易通过一个被动的机制排泄到尿液中[9]。据此推测,尿液中ACT A水平的测定可以用来缺氧缺血性脑病的诊断及病情判断,对判断预后、指导治疗提供重要的参考依据。
本研究通过对所有新生儿生后即刻行动脉血气分析,发现正常对照组与轻度HIE组、中重度HIE组有显著性差异(P<0.05),而轻度HIE组与中重度HIE组无显著性差异(P>0.05),提示脐动脉血气分析虽然能较准确地反映患儿出生时缺氧程度,但却不能判断HIE脑损伤程度。通过比较正常对照组、轻度HIE组、中重度HIE组不同时间点的尿激活素A含量发现:中重度HIE组尿激活素A含量显著高于正常对照组(P<0.01)和轻度HIE组(P<0.01),正常对照组和轻度HIE组尿激活素A含量无显著性差异(P>0.05);尿激活素A含量与HIE病情程度呈正相关,与缺氧缺血性脑损伤的部位及有无颅内出血无关;以尿激活素A含量>70 ng/L为临值判断中重度HIE的发生,各时间段尿激活素A含量均有高度的敏感性及特异性,为诊断中重度HIE、判断疗效、评估预后提供可靠依据。该研究技术还具有标本易搜集、患儿痛苦小、家长易接受、花费低及检测速度快等优点,在基层医院亦可开展,具有广阔的发展前景。