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目的探讨酶法分离新生大鼠心肌细胞过程中的各种影响因素，对Simpson经典方法进行改进，提高原代心肌细胞存活率及搏动率。方法采用低浓度的胰酶消化3～4次后，再用低浓度的Ⅱ型胶原酶消化一次，用短时间的2次差速贴壁法分离培养心肌细胞。结果在分离培养新生鼠心肌细胞过程中，胰酶和胶原酶合用，并改变差速贴壁时间，得到高存活率和高纯度的心肌细胞，细胞搏动率高，持续时间久。结论分离培养大鼠心肌细胞时，低浓度的胰酶和胶原酶合用，并用2次差速贴壁，可提高原代心肌培养的存活率和纯度，使细胞搏动良好。