【摘 要】
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为了研究结核杆菌毒力因子ESAT6在结核杆菌感染细胞过程中的功能.采用分子生物学方法,根据Gen-Bank中登录的结核杆菌H37Rv的ESAT6基因序列设计1对引物,以结核杆菌H37Rv基因组
【机 构】
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石河子大学动物科技学院,新疆地方与民族病高发病教育部重点实验室,石河子大学医学院
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为了研究结核杆菌毒力因子ESAT6在结核杆菌感染细胞过程中的功能.采用分子生物学方法,根据Gen-Bank中登录的结核杆菌H37Rv的ESAT6基因序列设计1对引物,以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增得到ESAT6基因DNA片段.将扩增片段克隆于pGM18-T载体中,测序验证后,再将ESAT6基因亚克隆至pEGFP-N1中,经核苷酸序列测定和酶切鉴定获得重组表达质粒pEGFP-N1-ESAT6.用重组表达质粒pEGFP-N1-ESAT6转染293T细胞.结果显示:重组表达质粒pEGFP-N1-ESAT6测序结果正确,转染细胞后出现绿色荧光,经Western blot分析鉴定,可见约35 kDa的预期蛋白条带,证实ESAT6-EGFP融合蛋白在293T细胞中获得了表达.研究结果为进一步研究毒力因子ESAT6在感染宿主细胞中所发挥胞内生存机制奠定了基础.
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