【摘 要】
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CpG ODN是以非甲基化CpG为核心的经硫代修饰的单链脱氧寡核苷酸高分子聚合物,具有免疫刺激作用.近年来,CpG ODN引起了疫苗、哮喘、肿瘤等预防及治疗中的广泛研究.CpG ODN通过
【机 构】
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云南沃森生物技术股份有限公司,云南昆明,650106
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CpG ODN是以非甲基化CpG为核心的经硫代修饰的单链脱氧寡核苷酸高分子聚合物,具有免疫刺激作用.近年来,CpG ODN引起了疫苗、哮喘、肿瘤等预防及治疗中的广泛研究.CpG ODN通过固相法进行合成时,易产生n-1,n-2杂质序列,使得目的序列纯度降低.因此,文章建立了一种反相色谱法对合成后的序列进行检定.通过采用反向层析色谱C18柱,甲醇-六氟异丙醇溶液为流动相,线性梯度洗脱,体积流量为0.25 mL/min,检测波长为260 nm,柱温60℃,进样量5μL,获得了精确度较高的检定结果.之后,对比了毛细管凝胶电泳及反相色谱分别对杂质序列的检测结果,发现反相色谱的检测结果更优,分离度达1.4以上,而毛细管电泳法无法有效检定n-1序列.此外,该方法进行了方法学的验证,在16.5 ～ 660 μg/mL浓度范围内线性良好,R2=0.991 2.回收率为98.7％,进行了6个批次样品的精密度与重现性检定,检定结果良好,RSD≤5％.因此文章所述纯度检定方法效果较佳,精密度及准确度更高,适合于CpG ODN序列的纯度检测,为核酸序列在未来的应用奠定了基础.
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