【摘 要】
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目的 利用CRISPR/Cas9技术构建lncRNA UCA1基因敲除的A549/DDP细胞株.方法 设计并合成sgRNA引物序列,退火形成UCA1-sgRNA双链DNA,与线性化pGK1.1载体连接获得重组质粒;电转染至A549/DDP细胞,对pool细胞(混合克隆)测序检测敲除效率,提取pool的靶细胞进行PCR扩增获得杂交DNA;CruiserTM Enzyme酶切筛选阳性克隆细胞,并对阳性克隆进行测序、TA克隆测序、RT-PCR验证.结果 重组质粒测序结果显示,4个UCA1敲除重组质粒在靶位点插入
【机 构】
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温州医科大学附属第一医院医学检验中心,浙江温州325000
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目的 利用CRISPR/Cas9技术构建lncRNA UCA1基因敲除的A549/DDP细胞株.方法 设计并合成sgRNA引物序列,退火形成UCA1-sgRNA双链DNA,与线性化pGK1.1载体连接获得重组质粒;电转染至A549/DDP细胞,对pool细胞(混合克隆)测序检测敲除效率,提取pool的靶细胞进行PCR扩增获得杂交DNA;CruiserTM Enzyme酶切筛选阳性克隆细胞,并对阳性克隆进行测序、TA克隆测序、RT-PCR验证.结果 重组质粒测序结果显示,4个UCA1敲除重组质粒在靶位点插入的片段位置、方向及序列与预期结果一致,证明4个UCA1敲除重组质粒均构建成功.克隆细胞酶切结果显示敲除条带明显小于对照条带;测序及TA克隆测序结果与酶切结果一致;RT-PCR显示UCA1表达水平明显低于对照组(P＜0.001).结论 成功构建UCA1基因敲除的A549/DDP细胞株,为后续的进一步研究提供了实验基础.
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食源性疾病预防是全球最广泛、最常见的公共卫生问题之一,给全球居民带来严重的健康危害和沉重的经济负担,已经成为世界性公共卫生问题.食源性疾病监测在我国已经历20余年发展历程,国家食源性疾病监测报告系统已经在吉林省范围内推广使用10年有余.但是,现有相关信息系统在使用上仍存在着许多不足,总体上缺乏数据整合与分析的综合性信息化平台,存在“信息孤岛”现象,严重影响和制约着食源性疾病监测工作的有效开展.
目的 探讨2型糖尿病合并感染血培养阳性患者的病原菌分布特点及耐药情况.方法 选取2018年2月至2019年8月本院收治的2型糖尿病合并菌血症患者224例.收集每位患者的血培养标本,进行细菌培养,K-B纸片法进行药敏试验,以铜绿假单胞菌为质控菌株.根据药敏试验结果将患者分为多重耐药组和非多重耐药组,收集两组患者的一般资料、空腹血糖、空腹胰岛素、碳青霉烯类药物暴露史.结果 224例2型糖尿病血培养阳性患者中金黄色葡萄球菌检出率最高为30.36％,其次为鲍曼不动杆菌23.21％、草绿色杆菌22.32％;金黄色葡
目的 建立快速检测血样中氟马西尼、咪达唑仑、罗哌卡因和地佐辛浓度的方法.方法 血样经乙腈沉淀蛋白后,用HPLC-MS/MS检测,在ESI正离子模式下结合多离子反应检测模式,对待测血样进行分析测定.结果 待测药物在一定线性范围内,线性关系良好,回收率在95.6％ ～ 109.8％,日内精密度在1.06％ ～ 4.48％,日间精密度在2.23％ ～7.48％,氟马西尼最低检出限为0.5 ng/ml,定量限为2 ng/ml;罗哌卡因检出限为0.3 ng/ml,定量限为1 ng/ml;地佐辛检出限为1 ng/ml
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