【摘 要】
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目的 通过分离、纯化、鉴定及蛋白质氨基酸测序3-磷酸甘油醛脱氢酶(G3PD)修饰蛋白(MP),观察庆大霉素诱发大鼠急性肾小管坏死(ATN)时, MP抗自由基损伤及对肾小管上皮细胞的修
【机 构】
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中国医科大学附属第一医院肾内科,沈阳,110001沈阳军区总医院医学实验科;中国医科大学实验技术中心;
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目的 通过分离、纯化、鉴定及蛋白质氨基酸测序3-磷酸甘油醛脱氢酶(G3PD)修饰蛋白(MP),观察庆大霉素诱发大鼠急性肾小管坏死(ATN)时, MP抗自由基损伤及对肾小管上皮细胞的修复作用.方法 采用Western印迹法及间接免疫荧光检测等方法对MP进行鉴定分析.纯化的MP以氨基酸自动分析仪测定氨基酸序列.将SD雄性大鼠随机分成正常对照组(腹膜内注射0.9%氯化钠溶液2mL-/d×7d+0.9%氯化钠溶液2mL/dX4d)、阴性对照组(腹膜内注射庆大霉素140mg·kg-1·d-1×7d+0.9% 钠溶液2mL/d×14d)、阳性对照组(腹膜内注射庆大霉素140mg·kg-1·d-1×7d+表皮生长因子 20μg·kg-1·d-1×14d)及实验组(腹膜内注射庆大霉素140mg·kg-1·d-1×7d+MP 250μg·kg-1·d-1×14d).应用MP观察7和14d的ATN大鼠模型血清及肾组织中脂质过氧化物(LPO)、还原型谷光苷肽(GSH).及一氧化氮(NO)水平的动态变化.通过光学显微镜、电子显微镜及免疫组织化学等形态学方法,观察MP修复ATN时大鼠肾小管上皮细胞的组织形态学及细胞间黏附因子-1(ICAM-1)表达的变化.同时测定血肌酐(SCr)水平.结果 间接免疫荧光法证实, MP位于细胞质内,且钾浓度为3.2mmol/L条件下的荧光强度明显强于钾浓度为5.4mmol/L时.MP由25个氨基酸残基组成.实验组的血清及肾皮质匀浆中LPO、NO水平均较阴性对照组明显下降(P值均
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