【摘 要】
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目的 构建和原核表达布鲁氏菌膜蛋白Omp2a,并进行抗原性鉴定. 方法 将布鲁氏菌外膜蛋白Omp2a基因连接到pET-30α原核表达载体上,转化到大肠埃希菌菌株BL21内.重组蛋白rOmp2a
【机 构】
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新疆医科大学基础医学院,新疆乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院,中亚高发病成因与防治国家重点实验室
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目的 构建和原核表达布鲁氏菌膜蛋白Omp2a,并进行抗原性鉴定. 方法 将布鲁氏菌外膜蛋白Omp2a基因连接到pET-30α原核表达载体上,转化到大肠埃希菌菌株BL21内.重组蛋白rOmp2a经IPTG诱导,亲和层析纯化后用SDS-PAGE凝胶电泳分离,确定目的蛋白的大小和表达丰度.通过Western blot与患者血清反应,确定重组rOmp2a的抗原性及诊断价值. 结果 成功构建布鲁氏菌外膜蛋白Omp2a的原核表达系统,测序表明阅读框架正确.用IPTG可诱导高表达Omp2a,SDS-PAGE显示其分子质量单位为38.4 ku,且其表达蛋白以包含体形式存在.Western blot显示rOmp2a能被布鲁氏菌感染患者血清识别,而不与细粒棘球绦虫和单纯疱疹病毒感染者血清反应.结论 大肠埃希菌原核表达系统可高效表达不可溶的rOmp2a蛋白,该蛋白具有反应原性,对布鲁氏菌感染患者具有潜在的诊断价值.
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