【摘 要】
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为解决杆状病毒表达系统存在的表达量低和毒种种子批代次窄问题，加快杆状病毒表达系统产业化进程。本研究首次通过Red和Cas9两种重组技术，先后对影响蛋白表达的V-cath、ChiA、P10和重组杆状病毒基因组稳定性的FP25K和DA26基因进行缺失。同时基于对CSFV-E2蛋白的结构和糖基化预测分析，突变影响同源二聚体二硫键形成的糖基化位点。最后通过悬浮转染的方式提高拯救病毒的滴度。结果表明对E2基
【基金项目】
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郑洛新自创区创新引领型产业集群专项《猪伪狂犬;圆环与肺炎支原体基因工程疫苗的研发与产业化》201200211200；
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为解决杆状病毒表达系统存在的表达量低和毒种种子批代次窄问题，加快杆状病毒表达系统产业化进程。本研究首次通过Red和Cas9两种重组技术，先后对影响蛋白表达的V-cath、ChiA、P10和重组杆状病毒基因组稳定性的FP25K和DA26基因进行缺失。同时基于对CSFV-E2蛋白的结构和糖基化预测分析，突变影响同源二聚体二硫键形成的糖基化位点。最后通过悬浮转染的方式提高拯救病毒的滴度。结果表明对E2基因突变后，表达的E2蛋白95%以同源二聚体形式存在。通过供体质粒优化和病毒载体基因缺失，E2蛋白的表达水平提高约4倍，可稳定表达蛋白的重组杆状病毒毒株代次从P7代延长至P20代。悬浮转染获得的重组杆状病毒滴度提高约70倍，同时获得足量低代次的毒种，有效缩短从毒种构建到蛋白表达时间，有效解决杆状病毒表达系统表达量低和毒种种子批代次窄的问题，为猪瘟亚单位疫苗研发奠定基础。
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